严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)人源性单链抗体文库的构建

目的构建人源性严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)单链抗体(scFv)文库,并用SFTSV颗粒对文库进行初步筛选。方法提取8例SFTS恢复期患者外周血淋巴细胞的总RNA,逆转录为cDNA;并以此为模板PCR扩增人源抗体轻链库(Vκ和Vλ)和重链库(VH),再经过重叠PCR随机拼接成scFv基因文库,最后克隆入噬菌粒载体pComb3XSS中,将重组噬菌粒电转化感受态XL1-Blue细胞,得到SFTSV抗体文库,检测文库库容及多样性,并用SFTSV颗粒作抗原对抗体文库进行初步筛选。结果构建的人源SFTSV抗体文库的库容为2.8×10~7,测序结果表明文库多样性好,经过初步筛选获得21个克隆的人源化scFv,具有与SFTSV颗粒结合的活性。结论成功构建了人源抗SFTSV的scFv文库。     

新生儿溶血症及其预防(摘要)

新生儿溶血症的原因及临床表现。新生儿溶血症(非感染)的病因如母血内含有对胎儿血型不配合的免疫抗体(IgG)时,这些抗体可通过胎盘进入胎儿循环,引起胎儿红细胞凝集而发生溶血,且可持续到胎儿出生以后。其临床表现轻重差异很大。Rh血型不     

幼儿园儿童蛲虫感染综合防治效果观察

[目的]了解杭州市幼儿园儿童蛲虫感染现状及综合防治的效果,为制定最佳的防治对策提供科学依据。[方法]选择杭州市江干区2所乙级幼儿园,采用均衡对照法设立实验组和对照组。1所幼儿园的220名儿童作为实验组,采用健康教育、卫生习惯改善、集体驱虫等综合防治方法;另1所幼儿园的131名儿童作为对照组,采用单纯驱虫法。分别调查防治前后的蛲虫感染率,比较防治前后总感染率的保护率、效果指数,对防治措施进行评价。[结果]实验组蛲虫感染率由综合防治前的3.64%(8/220)下降至防治后的1.82%(4/220),保护率为50.00%,效果指数为2.00。对照组蛲虫感染率由综合防治前的3.82%(5/131)下降至防治后的3.05%(4/131),保护率为20.16%,效果指数为1.25。[结论]加强健康教育、改善卫生习惯、开展集体驱虫等综合防治措施比单纯驱虫能更有效控制蛲虫再感染。     

对叠氮-L-苯丙氨酸盐酸盐的合成及其在重组人内皮抑素中的定点引入

以对硝基-L-苯丙氨酸为原料,通过5步反应制备纯度较高的对叠氮-L-苯丙氨酸盐酸盐。利用构建好的重组表达载体和正交氨酰tRNA合成酶/tRNA(MjTyrRS/tRNA)系统将对叠氮-L-苯丙氨酸(pAzPhe)定点(31位)引入到人内皮抑素分子中,表达人内皮抑素中突变体——rhEs31m。对分离纯化所获得的目的产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定,突变体rhEs31m电泳纯度达90%以上,同时可被抗人内皮抑素抗体特异性识别。通过MTT法检测rhEs31m体外抗人脐静脉内皮细胞增殖活性,结果显示:与野生型rhEs相比,rhEs31m保留了大部分生物活性。本实验表明单个pAzPhe的定点引入并未破坏重组人内皮抑素的空间结构和生物活性。     

含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化

优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列突变为TTAA序列,同时将正交酪氨酰tRNA合成酶的第286位天冬氨酸突变为精氨酸以提高对抑制型tRNA反密码子CUA的识别力。然后将质粒pST和pET32a-mhEn转化到大肠杆菌DH10BDE3中得到重组工程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养,并经IPTG诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获得人内皮抑素突变体,纯度大于90%。通过对正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统的优化,有效提高了系统引入对叠氮苯丙氨酸的效率,人内皮抑素突变体的表达量有了显著提高。     

不同出液装置的皂液细菌污染的调查

目前医院常用的洗手液出液装置大体分为两大类:一类是开放式出液装置,分为电子感应式出液和普通正压泵出液装置;另一类为全密闭式真空泵负压出液装置。为验证这两种不同的出液装置对皂液带来的影响,连续14 d对临床上应用中的皂液进行了细菌学检测,现将调查结果报道如下。1材料与方法1·1皂液的选择选用普通洗手皂液,经检测细菌均<100CFU/ml的合格产品。选用两种出液装置,分别在超净操作台内将皂液灌装在若干个1L装开放式正压泵装置和全密闭式真空泵负压出液装置内(后者由上海利康消毒高科技有限公司提供)。1·2细菌检测分别选在手术室I、…     

用点穴按摩和针灸促进脑出血和脑梗塞患者临床症状恢复的体会

脑出血、脑梗塞是最常见的脑血管病，常表、现为语言障碍，吞咽困难、偏瘫或四肢瘫，甚至昏迷等。在有效的实施抢救治疗和护理计划的过程中，早期根据临床上出现的不同症状取不同的穴位，按不同的手法行点穴按摩或针灸来流通经络，与此同时鼓励病人行各部位的功能活动，促进症状的恢复，缩短了病程。此方简便易行，见效快。我急诊病区94年一年收治1143人，其中脑出血64人，脑梗塞147人。此病致残率高；给社会和家庭带来沉重负担，病人的康复是人们最现注的问题。现将方法介绍如下：1症状的选择与手法1，五口角流涎，吞咽困难者用拇指或食指…     

替硝唑、根管糊剂治疗根尖周炎疗效观察

目的：探讨替硝唑治疗根尖周炎，观察其临床疗效。方法：对作根管治疗的患牙，应用替硝唑棉捻消毒根管，再将替硝唑粉加根充糊剂调状导入根管作根管充填；以４０例用甲硝唑粉加根充糊剂作根充的患牙为对照，经两年多时间连续观察，并检测根管消毒前后根管内压套菌的变化情况。结果：观察表明，替硝唑组和甲硝唑组对主要厌氧菌如消化链球菌、类杆菌、梭形菌、放线菌等的抑菌率分别为９４．５０％和７２％（Ｐ〈０．０１）。替硝唑治疗根尖周炎的临床疗效（有效率９４％）也优于甲硝唑组（有效率为６５％）。结论：替硝唑作根管消毒，并加入根充糊剂用以根管充填治疗根尖周炎是一种有效的方法。     

新型冠状病毒双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法的建立与评价

目的 建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法,以利于SARS-CoV-2感染的快速诊断。方法 采用2株针对重组核蛋白(nucleoprotein, NP)的单克隆抗体WT5(捕获抗体)和WT9(检测抗体),构建双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法,并评价该方法的灵敏度、特异性、稳定性。结果 建立以SARS-CoV-2抗原为靶向分子的免疫胶体金层析方法。该方法能在10～15 min内完成对SARS-CoV-2抗原的检测,可检测病毒抗原浓度5 ng/mL以上的SARS-CoV-2阳性样本;制备的免疫胶体金层析试纸条的灵敏度和特异度分别为87.50%、99.36%,阳性预测值和阴性预测值分别为97.67%、96.27%;与鼻病毒、EB病毒、季节性流感(H3N2)无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性。结论 SARS-CoV-2双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法特异性高、稳定性好,操作简单、快捷,具备较好的快速诊断应用前景。