骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度变化的研究

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度的变化。方法分离纯化SD大鼠MSCs进行传代培养,传至第5代时,按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,采用免疫组化和Realtime PCR技术检测诱导前后GAP-43、NSE、NF和Nestin的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果诱导后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高(P<0.05),但GAP-43、NSE、NF和Nestin基因表达改变不显著(P>0.05),更换诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min时细胞荧光强度仍高于诱导前。结论 MSCs诱导分化为神经元样细胞后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高,但基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控,游离钙离子可能对诱导分化有促进作用。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca2+浓度的变化

背景：单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。 目的：探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。 方法：分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50 mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24 h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和Realtime PCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。 结果与结论：①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P < 0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P < 0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca2+浓度的变化

背景：单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。目的：探讨 GM1对骨髓间充质干细胞按照 Woodbury 经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离 Ca2+浓度的变化。方法：分离纯化 SD 大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50 mmol/L 神经节苷脂设为 GM1组,预培养24 h 后按照 Woodbury 经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和 Realtime PCR 技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和 mRNA 表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果与结论：①加入 GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P <0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入 GM1组,细胞内游离 Ca2+浓度较对照组有所增加(P <0.05)。说明 GM1能够促进细胞内 Ca2+浓度增加,游离 Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明 Woodbury 经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。     

RNA干扰对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对SKOV3卵巢癌细胞株Skp2表达的抑制作用.方法:设计合成针对Skp2的小干涉RNA(siRNA)并进行转染.实验分为空白对照组、转染组1、转染组2、转染对照组及阴性对照组.采用Real time PCR和Western blotting技术检测各组Skp2 mRNA和蛋白水平的变化,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组卵巢癌细胞增殖情况.结果:应用Skp2-siRNA干扰SKOV3卵巢癌细胞株后,转染组1、转染组2的Skp2mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与空白对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),转染组1与转染组2之间差异无统计学意义(P＞0.05).转染组1与转染组2基因沉默效率分别为75.31%和76.86%,蛋白抑制率分别为62.10%和63.11%,细胞增殖抑制率分别为52.75%和53.06%.结论:RNAi技术能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株Skp2的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖.     

5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响

目的：探讨体外不同浓度5-氟尿嘧啶对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2表达的影响。方法不同浓度5-氟尿嘧啶0、10、20、40和80μg／ml作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h,通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组卵巢癌细胞增殖情况,采用免疫细胞化学染色法和Realtime PCR技术检测各组Skp2蛋白和mR-NA水平的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72h后,随着浓度的增加,细胞增殖受限明显,Skp2蛋白和mRNA表达水平明显降低,并与5-氟尿嘧啶的浓度呈负相关（ r＝－0．816,P＜0．05;免疫组化Skp2：r＝－0．926,P＜0．05;RealtimePCRmRNA：r＝－0．899,P＜0．05）。结论5-氟尿嘧啶能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖,并能抑制Skp2蛋白和mRNA的表达。     

吉西他滨对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响

目的探讨不同浓度吉西他滨对体外培养人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法不同浓度（0、10、20、40和60μmol/L）吉西他滨作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h,通过细胞计数试剂盒CCK-8检测各组卵巢癌细胞增殖情况,采用免疫细胞化学染色法和RealTime PCR技术检测各组Skp2蛋白及其mRNA水平。结果不同浓度吉西他滨作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72 h后,随着浓度增加细胞增殖明显受限,Skp2蛋白及其mRNA水平降低,并且上述结果与吉西他滨浓度均呈负相关。结论吉西他滨能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖,机制可能与抑制Skp2表达有关。