慢性乙肝患者血清细胞因子、乙肝病毒与肝纤维化的关系

目的：探讨慢性乙肝患血清细胞因子（TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8），乙肝病毒（HBV）对肝纤维化（HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN）的影响作用。方法：采用ELISA和RIA方法检测171例慢性乙肝患血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8，HLA，PCǚ，C-Ⅳ，LN的水平，HBV－DNA定量检测采用PCR方法。结果：慢性乙肝患血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8，HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN的含量均不同程度高于对照组，且随肝损害程度的加重而升高，与肝损害程度呈正相关关系（P＜0．05或P＜0．01）；须血清TGF－β1水平与血清HA，PCⅢ，C-Ⅳ，LN水平具有直线相关关系。HBV－DNA阳性组（Ⅱ组）均高于HBV－DNA阴性组（I组），且在慢性中，重度肝炎间差异显（P＜0．05）。结论：血清TGF－β，TNF-α，IL-6，IL-8参与慢性乙肝的发病机制及肝纤维化的形成，且与病毒复制的活跃程度相关。     

汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用

目的：研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法：构建用于研究Syk和G1ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统，验证G1ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果：哺乳动物细胞双杂交分析证实G1ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用；而突变体分析表明，这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论：HTNVG1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。     

Phenotypic Knockout of HIV-1 Chemokine Coreceptor CXCR4 and CCR5 by Intrakines for Blocking HIV-1 Infection

To investigate the phenotypic knockout of HIV-1 chemokine coreceptor CXCR4 and CCR5 by intrakines and its inhibitory effect on HIV-1 infection. Primary human PBLs were transduced with the recombinant vector pLNCX-R-K-S-K(△NGFR), followed by anti-NGFR/anti-IgG-magnetic bead method selection and FCM detection. The transduced PBLs were infected with DP1 HIV-1 virus thereafter envelope-mediated syncytium formation and p24 detection were carried out to study the blockage of HIV-1 infection by co-inactivation of CCR5 and CXCR4. pLNCX-R-K-S-K (△NGFR)-transduced PBILs were isolated with an anti-NGFR/anti-IgG-magnetic bead method. After isolation, about 70% of the PBLs were positive for the NGFR marker. When the transduced PBLs were infected with DP1 HIV-1 virus, envelop-mediated syncytium formation was almost completely inhibited by pLNCX-R-K-S-K(△NGFR) transfection. Also, p24 antigen was very low in the cultures of pLNCX-R-K-S-K (△NGFR) transduced PBLs. pLNCX-R-K-S-K(△NGFR) transduction inhibited the production of DP1 p24 antigen by 15%, 43% and 19% on days 4, 7 and 10 respectively. The lymphocytes with the phenotypic knockout of CCR5 and CXCR4 could protect primary human PBLs from DP1 HIV-1 virus infection.     

不同血清型汉坦病毒基因重排的研究

目的探明汉坦病毒HTN型与SEO型、HTN型与PHV型之间基因重排的频率和特点。方法分别用相同滴度的汉坦病毒HTN型与SEO型(76-118株与SR-11株),及汉坦病毒HTN型与PHV型(76-118株与PHV株)毒株分别混合感染VeroE6细胞,用空斑形成试验挑选子代病毒克隆,挑得的单个病毒克隆在VeroE6细胞上扩增。分别用分型引物对子代病毒进行RT-PCR实验,以确定子代病毒L、M、S片段核酸的来源,鉴定子代病毒基因型。结果发现76-118株与SR-11株混种的子代病毒株基因30/44株来源于亲代病毒,9/44株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与PHV株混种的子代病毒株基因26/36株来源于亲代病毒,3/36株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与SR-11株混种的子代病毒株的基因重排率(20.45%)明显高于76-118株与PHV株混种的子代病毒株(8.33%)。结论这种重排率的差异可能是由于HTN型与SEO型HV基因核酸序列之间的同源性较高,而更容易发生基因重排。而HTN型与PHV型HV基因核酸序列之间的同源性较低,发生基因重排的机会显著降低。     

汉滩病毒核蛋白诱导肾综合征出血热患者的T淋巴细胞反应

目的 测定汉滩病毒(HTNV)核蛋白(NP)C-端多肽诱导肾综合征出血热(HFRS)患者的特异性T淋巴细胞反应,为HFRS发病机制、疫苗研制及抗病毒免疫反应研究提供资料.方法 采用Ficoll密度梯度离心法,分离HFRS恢复期患者外周血单个核细胞(PBMC),用IFN-y酶联免疫斑点试验(ELIspot)测试13名患者对23条多肽的T淋巴细胞反应,筛选出反应较强的肽段.结果 5名患者有不同程度的肽特异性T细胞反应.No.70肽可诱导3号和10号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为51和55 SFC/106 PBMC,No.51肽可诱导4、7、12号患者分泌IFN-y,T细胞频率分别为90、65、95 SFC/106PBMC.结论 No.51肽和No.70肽可诱导较强的T淋巴细胞反应,可能是NP C端的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)袁位.     

PBL教学法在传染病学临床实习教学中的合理应用

在传染病学临床实习中,使用以问题为基础的教学法(PBL),以期增强学生主动学习的积极性、改善教与学的互动性,提高采集分析临床资料的能力。作者就在传染病学临床实习教学中使用PBL教学法及相关问题进行了探讨。     

慢性HBV感染者外周血CD4+CD25high调节性T细胞初步分析

目的 分析不同临床乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的水平及其与各种临床指标的关系.方法 采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者(HBsAb+组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例)及12例健康成人外周血标本,流式细胞仪分析外周血中CD4+CD25high Treg含量,ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,RT-PCR法检测HBV DNA载量,同时进行肝脏生化功能检测,并进行统计学分析.结果 HBV慢性感染者[(12.35±6.48)个/μl;(1.82 4-0.87)%)]及健康成人外周血标本[(8.91±3.11)个/μl,(1.35±0.39)%]中CD4+CD25highTreg绝对计数和其占CD4+T细胞百分含量差异均无统计学意义(P＞0.05);分组分析发现,免疫耐受期组CD4+CD25highTreg占CD4T细胞百分含量高于HBsAb+组、活动肝炎组及健康对照组(P＜0.05);免疫耐受期组CD4+CD25highTreg绝对计数高于健康对照组(P＜0.05);余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).分析CD4+CD25highTreg含量与临床指标间相关性发现,CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈负相关(r=-0.418,P=0.038),与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.344,P=0.021),与HBV DNA水平无相关性(r=0.118,P＞0.05);CD4+CD25highTreg绝对计数与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.360,P=0.015),与ALT水平及HBV DNA水平无相关性(r=-0.211,r=-0.060,P＞0.05).结论 CD4+CD25highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用.     

慢性肝病中抗肝抗原自身抗体的检测

目的　探讨中国人不同病因所致慢性肝病患者中抗肝抗原自身抗体的存在状况及自身免疫性肝病的自身抗体特征。方法　 166例肝功能异常患者分为 6组 :自身免疫性肝炎 (AIH ) 12例、原发性胆汁性肝硬化 (PBC) 2 0例、原发性硬化性胆管炎 (PSC)13例、HBV组 66例、HCV组 2 2例、肝豆状核变性 (HDL) 3 9例。用间接免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)、平滑肌抗体 (SMA)、抗肝肾微粒抗体I型抗体 (anti LKM1)、抗线粒体抗体 (AMA)和抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA) ,免疫印迹法检测抗肝细胞胞溶质抗原 1型抗体 (anti_LC1)、抗可溶性肝抗原 /肝胰抗原抗体 (anti_SLA/LP)、抗肝肾微粒抗体 1型 (anti_LKM1)、AMA_M2亚型等多种肝抗原自身抗体。结果　 166例中ANA、AMA、M_2、pANCA阳性率在 7组中有显著差异 (P <0 .0 1)。PBC中AMA、M 2阳性检出率均为 10 0 % ,PSC中pANCA阳性检出率为 5 3 8% ,Fisher精确检验在a =0 .0 0 2水准与其他各组比较有显著差异。AIH与PBC的ANA阳性率分别为10 0 %和 60 % ,Fisher精确检验在a =0 .0 0 2水准二者无显著差异。与其他各组比较有显著差异。在AIH组SMA阳性率为 2 5 % ,LKM 1、LC 1、SLA/LP阳性率均为 8.3 % ,统计学处理与其他组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,可能与病例少有关。PBC中分别有 1     

汉滩病毒S片段基因cDNA 3′端非编码区对核蛋白在大肠杆菌中表达的影响

为了探讨汉滩病毒Ｓ片段ｃＤＮＡ３′端非编码区基因对核蛋白表达的影响，先后构建了两个核蛋白的表达质粒（ｐＢＶＳ２２和ｐＢＶＳＸ），其中ｐＢＶＳ２２不含非编码区基因，ｐＢＶＳＸ含有３′端非编码区基因。比较两者在大肠杆菌中表达核蛋白的水平后发现３′端非编码区对核蛋白的表达有明显的负调控作用，表达量下降近５０％。可能的原因是非编码区中含有非常丰富的ＡＴ碱基。该研究结果为进一步提高汉滩病毒核蛋白的表达量积累了经验，也为高效表达其它病毒结构蛋白提供了有益的资料。