两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较

目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要.本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,H...     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的：建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法：选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1% I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验：测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果：体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养 36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。 ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54) μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论：ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。     

2008～2018年我国手足口病流行性分析

目的:分析我国2008～2018年手足口病的流行情况,为手足口疫情预防与控制提供参考.方法:从中国知网(CNKI)网站上检索符合条件的文献,对2008～2018年全国手足口病报道数据进行系统分析.采用Excel表格和SPSS 20.00进行数据统计,GraphPad Prism 6进行制图.结果:分析结果显示,2008...     

亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK／ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK／ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6 μmol／L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl 2、Bax、p53、Caspase 3及MAPK／ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P<005);Western blotting结果显示,实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase 3、p JNK／JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl 2、p ERK／ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005);RT PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<005)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK／ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。     

低强度脉冲超声对人脐带干细胞体外增殖和成软骨分化的影响

目的:研究低强度脉冲超声(LIPUS)对体外培养人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)增殖和成软骨分化的影响。方法:将P_4代h UCMSCs随机分为对照组(C组)L30组(30m W/cm~2)、L_(50)组(50m W/cm~2)、L_(80)组(80m W/cm~2),对照组予超声假照处理,各LIPUS刺激组分别刺激5、10、20min/d。LIPUS刺激后观察细胞生长情况,连续刺激1—5天后采用CCK-8检测细胞增殖活性;连续刺激并成软骨诱导培养2周后分别采用ELISA法检测软骨特异性胞外糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原蛋白(Col2)的浓度,以及细胞阿利新蓝染色和Col2、DAPI荧光染色观察上述两种软骨特异性蛋白的分布水平。结果:①LIPUS刺激5d后观察刺激5min/d时L50组细胞集落更为密集,细胞增殖活性组内比较高于L30组和L80组(P0.05),组间比较高于对照组(P0.05),刺激10min/d、20min/d时各实验组随着刺激强度增加细胞增殖受到抑制,以L80组抑制增殖效果最显著(P0.05)。②LIPUS刺激并成软骨诱导5min/d时L30组细胞更为扁平宽大且阿利新蓝染色面积及Col2荧光强度较L50组、L80组及对照组更大,进一步分析胞外分泌GAG和Col2蛋白的含量为实验组高于对照组,以L30最为显著(P0.05),刺激10min/d、20min/d时各实验组之间以及与对照组组间无显著性差异。结论:①适宜参数的LIPUS刺激促进细胞增殖,以(50m W/cm~2、5min/d)最为显著,但随着刺激强度增大和刺激时间的延长,细胞的增殖能力下降;②在细胞诱导因子的协同作用下,在不影响细胞增殖率的情况下适宜参数(30m W/cm~2、5min/d)的低强度脉冲超声可促进人脐带间充质干细胞成软骨分化。     

海洋生物提取物中抗皮肤光老化活性成分的研究进展

 海洋生物是海洋资源的重要组成部分,具有抗菌、抗氧化、抗炎及光保护等生物活性,在医用护肤品和药物的生产中有重要的贡献。长期紫外线照射是皮肤外源性老化的主要原因。紫外线照射可损伤表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞,引起皮肤萎缩、皱纹及皮肤肿瘤等。海洋生物中有众多光保护物质,包括类菌孢素氨基酸、硫酸多糖、类胡萝卜素和多酚类物质等,这些物质在皮肤护理、化妆品和医药产品中有很大的开发潜力。本文综述了近年来海洋生物中的光保护物质及其在皮肤光老化中的应用进展。     

MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的定位和本质鉴定

目的检测和分析非肌性肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)在MYH9-RD患者中性粒细胞胞浆中的定位及表达,以确定包涵体的构成本质。方法应用间接免疫荧光技术,观察MYH9-RD患者及正常对照者NMMHC-ⅡA在胞浆中的定位和分布情况;应用Western blot技术检测和分析中性粒细胞中NMMHC-ⅡA在患者和正常对照者之间蛋白表达水平的差异。结果免疫荧光技术清楚地显示了患者中性粒细胞胞浆中呈绿色荧光的"梭形"包涵体的形态和轮廓,与瑞特姬姆萨染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;而正常对照者除有散点状的荧光斑点外,无包涵体形成;Western blot结果显示患者NMMHC-ⅡA表达量较正常对照者降低。结论 MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要成份是NMMHC-ⅡA,NMMHC-ⅡA的显阴性作用导致了包涵体的形成。     

DDX46基因慢病毒载体的构建及其在人膀胱癌细胞中的表达

目的 构建DDX46基因低表达慢病毒载体,并检测其在人膀胱癌细胞中的表达效果,为DDX46基因在人膀胱癌细胞中的研究奠定基础。方法 应用实时荧光定量检测5637细胞和T24细胞中DDX46 mRNA表达水平,以寻找合适的细胞系进行实验。分别以DDX46基因序列和普适型阴性序列为模板,设计合成靶点序列,并合成寡核苷酸双链,定向克隆到慢病毒质粒GV115,合成重组质粒shDDX46和shRNA,分别称之为实验组和对照组。将不同重组质粒与pHelper 1.0和pHelper 2.0分别转染293T细胞以包装成慢病毒颗粒后感染5637细胞和T24细胞。应用实时荧光PCR定量检测重组慢病毒感染5637细胞和T24细胞后DDX46 mRNA表达水平,判断其干扰效率。结果 5637细胞和T24细胞均高丰度表达DDX46mRNA,其结果（用ΔCt值表示）分别为（6.53±0.08）和（8.48±0.11）;重组慢病毒感染膀胱癌细胞后,在5637细胞中,实验组DDX46 mRNA的表达水平（用ΔCt值表示）为（0.32±0.01）,低于对照组（1.00±0.10）,差异有统计学意义（P<0.05）,其敲减效率为67.70%;在T24细胞中,实验组DDX46 mRNA的表达水平（用ΔCt值表示）为（0.11±0.01）,低于对照组（1.00±0.03）,差异有统计学意义（P<0.05）,其敲减效率为89.00%。结论 成功构建DDX46基因低表达慢病毒载体,为研究DDX46基因在膀胱癌细胞中的作用奠定了基础。     

基于公共数据库分析FABP5在肾透明细胞癌中表达及预后的意义

摘要： 目的 探讨脂肪酸结合蛋白5 （FABP5） 基因在肾透明细胞癌中的表达及预后意义。方法 提取Oncomine 和GEO数据库中有关FABP5的信息并进行表达情况分析, 通过DAVID数据库对差异基因进行功能注释, 采用 GEPIA进行预后分析。结果 Oncomine数据库中共找到445项FABP5在不同肿瘤类型中的研究数据集, 表达差异有统计学意义的结果中表达增高的有32项 （肾癌5项）, 表达降低的有24项 （肾癌0项）。肾癌中有4项涉及肾透明细胞癌和正常组织中FABP5的表达研究数据集。综合比较这4项数据集发现, FABP5在肾透明细胞癌中的表达量高于正常组织 （P＜0.05）。GEO数据库中GSE66271芯片数据分析结果发现差异基因FABP5在肾透明细胞癌中的表达量显著高于正常组织 （P＜0.01）。DAVID功能分析发现这些差异基因主要集中于影响细胞的转运蛋白活性和蛋白质的消化和吸收代谢功能。使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目的516例患者预后发现FABP5高表达的患者总体死亡率较高, 低表达FABP5的患者预后较好 （P=0.001 1）。结论 FABP5在肾透明细胞癌组织中呈现高表达,并与肾透明细胞癌预后差相关, 其有望成为抗肾透明细胞癌药物的重要治疗靶点。