黄芪-丹参煎液HPLC指纹图谱及多指标定量测定研究

目的建立黄芪丹参煎液的HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析方法,为黄芪丹参煎液质量控制提供科学依据。方法采用HPLC-UV法,ODS Hypersil DIM色谱柱(250 mm×4.6 mm,3μm);以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 mL/min,进样量20μL,检测波长254 nm,建立HPLC指纹图谱;采用LC-MS法,建立黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸11个成分含量测定方法,并采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对测定结果进行识别。结果 10批黄芪丹参煎液的指纹图谱中有12个共有峰,通过与化学对照品比对,指认出7个色谱峰,分别为1号峰咖啡酸、3号峰毛蕊异黄酮葡萄糖苷、6号峰迷迭香酸、8号峰紫草酸、9号峰毛蕊异黄酮、10号峰丹酚酸B、11号峰芒柄花苷,10批样品的相似度≥0.995。黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪皂苷Ⅱ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、丹酚酸B、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸线性关系良好,r2值均大于0.995;回收率为89.3%～110.9%。通过PCA可将10批黄芪丹参煎液分成2类,并可看出不同产地、不同批次药材之间的质量存在差异,进一步采用OPLS-DA筛选出导致质量差异的两个物质丹酚酸B和芒柄花苷。结论根据黄芪丹参煎液指纹图谱的建立,结合质谱进行定量,能够为其质量控制提供更可靠的参考。     

基于高效液相色谱法指纹图谱和一测多评法的荷芪散质量评价

目的:建立不同批次荷芪散的高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,并采用一测多评(QAMS)法测定其中甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金丝桃苷、荷叶碱、芦荟大黄素、橙黄决明素6种成分的含量。方法:采用HPLC,以金丝桃苷为内参物,建立10批荷芪散的指纹图谱及其余5个成分的相对校正因子(RCF),并测定其含量,比较QAMS法与外标(ESM)法的差异性。结果:建立的HPLC指纹图谱共标定了28个共有峰;金丝桃苷与甘草苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、荷叶碱、芦荟大黄素、橙黄决明素的RCF分别为1. 52、0. 71、0. 43、0. 71、0. 56,RSD 3. 0%,QAMS法与ESM法的测定结果差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:高效液相色谱法指纹图谱结合QAMS法可为评价荷芪散的质量提供参考。     

基于信息熵理论权重分析的正交设计法优选参黛愈疡灌肠液水提工艺

目的优选参黛愈疡灌肠液的水提工艺。方法以苦参碱、氧化苦参碱的提取率和干膏率为评价指标,采用信息熵理论确定各指标权重系数并计算综合评分。以煎煮时间、加水倍数、煎煮次数为考察因素,采用L9(34)正交试验筛选参黛愈疡灌肠液的最优提取工艺并进行验证。结果最优的提取工艺为饮片煎煮3次,每次加8倍量水、每次煎煮1 h,苦参碱、氧化苦参碱的平均提取率分别为0.117 1%、0.010 8%,平均干膏率为36.53%。结论优选的水提工艺重复性好、稳定可行,可为参黛愈疡灌肠液的后续开发和工业化生产提供科学依据。     

基于成分表征和网络药理学研究黄芪丹参煎液治疗急性肾损伤的质量标志物

摘要：目的:基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)和网络药理学研究黄芪丹参煎液治疗急性肾损伤的质量标志物(Q-Marker)。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,对黄芪丹参煎液的化学成分进行表征;运用SwissTargetPrediction等数据库预测黄芪丹参煎液化学成分与急性肾损伤的靶点和通路,绘制出“中药-核心成分-关键靶点-通路-疾病”网络图,预测与药效相关性最大的核心化合物指标;通过分子对接进一步验证所筛选的潜在Q-Marker。结果:从黄芪丹参煎液中共鉴定出20个化学成分;通过网络药理学筛选得到黄芪丹参煎液中与急性肾损伤相关的129个靶点,京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析表明其主要从磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PI3K-Akt)等信号通路实现对急性肾损伤的治疗,提示咖啡酸、黄芪甲苷、丹参醇A、黄芪皂苷Ⅱ和迷迭香酸等5个核心成分为黄芪丹参煎液治疗急性肾损伤的潜在Q-Marker。分子对接结果提示网络药理预测的Q-Marker可靠性较高。结论:通过成分表征和网络药理学关联分析,预测黄芪丹参煎液治疗急性肾损伤的潜在Q-Marker,为其整体质量控制提供参考依据。     

基于药效筛选和正交试验优化健脾益肾丸的制备工艺

目的通过药效研究筛选健脾益肾丸的制备工艺,并以正交试验进行优化,确定健脾益肾丸的最佳提取工艺。方法采用5/6肾切除方法制备大鼠慢性肾衰竭模型,以大鼠肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)含量降低值为指标,对拟定的健脾益肾丸A(打粉入药+水提)、B(打粉入药+提油+水提)和C(提油+水提)3种工艺路线进行筛选;继以黄芪甲苷含量和固形物质量为指标,采用正交试验优化加水量、煎煮时间和煎煮次数的提取工艺。结果药效实验表明,工艺A对慢性肾衰竭大鼠模型具有明显的改善作用,可作为该方丸剂成型工艺。该工艺中白术等5味药材单独粉碎成细粉,黄芪等其余药材的最佳提取工艺为药材每次加8倍量水,煎煮2次,每次煎煮1 h。结论健脾益肾丸能明显改善5/6肾切除大鼠模型的Cr、BUN含量,优选的制备工艺稳定、可行,为健脾益肾丸的后续开发提供依据。     

弓形虫GRA7基因的克隆表达及免疫分析

本文构建了刚地弓形虫RH株致密颗粒蛋白7(GRA7)基因原核表达重组质粒,进行蛋白表达并分析重组蛋白的免疫反应性.设计合成引物,从弓形虫RH株基因组DNA中特异扩增出GRA7基因片段并进行序列分析.目的片段用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后分别构建重组质粒pET32a-GRA7和pET28a-GRA7,而后转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中诱导表达,Western blotting分析表达蛋白.结果显示,从弓形虫RH株中成功扩增出大小约710 bp的GRA7基因片段,构建的重组质粒经双酶切和PCR鉴定及测序,目的基因片段与预期相符.重组质粒pET32a-GRA7经IPTG诱导后,可高效表达重组蛋白,Western blotting分析显示重组GRA7蛋白能被弓形虫慢性感染血清识别,而重组质粒pET28a-GRA7未能诱导表达出目的蛋白.原核表达的重组GRA7抗原具有特异的免疫反应性,为弓形虫的诊断应用和疫苗研究奠定了基础.     

吲哚美辛口服自微乳化给药系统的大鼠体内药动学研究

目的 研究吲哚美辛口服自微乳化给药系统(IDM-SMEDDS)在大鼠体内的药动学特征.方法 大鼠灌胃给予IDM-SMEDDS(给药剂量按IDM计为8.0 mg/kg),采用HPLC法测定IDM在大鼠血浆中的药物浓度,以IDM原料药制备混悬液作为参比,绘制两者血药浓度-时间曲线,DAS Ver2.0药动学软件计算药动学参数.结果 IDM-SMEDDS的药动学过程符合二室模型,权重因子为1/C2,IDM混悬液的药动学过程符合一室模型,权重因子为1/C2;大鼠口服IDM-SMEDDS的Cmax为42.56 μg/mL、Tmax为1h、AUC0-48h为814.25(μg·h)/mL,口服IDM混悬液的Cmax为9.72 μg/mL、Tmax为6h、AUC0-48 h为134.57(μg·h)/mL.结论 自微乳化给药系统可以提高吲哚美辛的口服生物利用度.     

正交试验设计法优选六高康颗粒水提工艺

目的优选六高康颗粒的水提工艺。方法以高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)法测定落新妇苷的含量;以落新妇苷的含量及出膏率为评价指标,以煎煮时间、加水倍数、煎煮次数为考察因素,采用L9(34)正交试验法筛选六高康方的最佳提取工艺并进行验证。结果落新妇苷质量浓度在4.84~154.75μg/mL(r=0.9994)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为102.73%,RSD为1.95%(n=9);最佳提取工艺为煎煮3次,每次加8倍量水,每次煎煮45 min;验证试验结果显示,落新妇苷平均含量为64.17μg/mL,平均出膏率为25.12%。结论优选的水提工艺重复性好、稳定可行。     

Box-Behnken响应面法优选豨桐凝胶贴膏的提取工艺

目的 优化豨桐凝胶贴膏的回流提取工艺条件.方法 以豨莶草的有效成分奇壬醇、臭梧桐的有效成分芹菜素及干膏得率为考察指标,以Box-Behnken响应面法进行工艺优化,研究加水量、提取时间及提取次数对考察指标的影响.结果 豨桐凝胶贴膏最佳提取工艺为12倍水,每次2 h,提取3次.采用优选出的工艺进行提取,奇壬醇质量分数为2.568 mg/g,芹菜素质量分数为0.05589 mg/g,干膏率为22.09%.结论 该优选工艺稳定可行,为豨桐凝胶贴膏的制备奠定了基础.     

盐酸雷洛昔芬自微乳在小鼠体内的组织分布

目的研究灌胃给予盐酸雷洛昔芬自微乳后小鼠体内的组织分布情况.方法分别按照100 mg/kg灌胃给予盐酸雷洛昔芬自微乳与市售片剂,采用HPLC法测定小鼠各组织(心、肝、脾、肺、肾)中盐酸雷洛昔芬的浓度,用DAS 2.0药动学软件计算比较自微乳和市售片剂的组织分布特点;用靶向效率、相对摄取率和相对靶向效率3个指标评价盐酸雷洛昔芬自微乳的靶向性.结果与市售片剂相比,自微乳在各组织均有不同程度增加,其中在体内药物浓度分布趋势为肝>肾>肺>脾>心,肾的相对摄取率为7.36,相对靶向效率为3.12.结论与市售片剂相比,盐酸雷洛昔芬制成自微乳后,体内组织分布广泛,对肾的靶向性最强.