焦磷酸测序检测铜绿假单胞菌的SHV基因点突变

目的:通过焦磷酸测序技术检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)铜绿假单胞菌的SHV基因点突变,探讨一种快速、准确的ESBLs基因分型方法。方法:双纸片法确定产ESBLs的铜绿假单胞菌,纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)法扩增ESBLs的SHV基因片段,用焦磷酸测序法检测16株产ESBLs铜绿假单胞菌的SHV基因35位和43位密码子点突变。结果:焦磷酸测序发现,本地区分离出的16株产ESBLs铜绿假单胞菌有10株扩增出SHV基因片段,且在43位密码子基因没有突变,35位密码子有基因突变,核苷酸由T突变为A,亮氨酸变为谷氨酰胺,突变发生率达到70%(7/10)。16株产ESBLs的菌株对亚胺培南全部敏感。结论:焦磷酸测序技术可快速检测产ESBLs铜绿假单胞菌的SHV基因点突变,具有准确、快速、实时和高通量等优点,可应用于产ESBLs菌株的ESBLs基因分型。     

焦磷酸测序检测产ESBLs革兰阴性菌的SHV基因型

目的探讨一种快速、准确检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌的ESBLs基因分型方法。方法双纸片法确定产ESBLs的临床分离菌,聚合酶链反应(PCR)扩增ESBLs的SHV基因片段,用焦磷酸测序技术对29株成都市区临床分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌进行SHV基因分型研究,检测SHV基因片段中编码35位氨基酸和编码43位氨基酸位点的基因多态性。同时,采用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果焦磷酸测序发现,本地区分离出的29株产ESBLs临床分离菌有21株扩增出SHV基因片段,且在43位氨基酸密码子均没有多态性,35位密码子有基因多态性,核苷酸由T突变为A,亮氨酸变为谷氨酰胺,突变发生率达到42.9%(9/21)。29株产ESBLs的菌株对亚胺培南全部敏感;对头孢西丁、头孢吡肟、头孢他啶耐药率分别为:大肠埃希菌29.4%、11.8%、41.2%;肺炎克雷伯菌50.0%、8.3%、33.3%;对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑啉、头孢呋辛和复方磺胺甲口恶唑的耐药性较高,均达到75%以上,对其他药物均有不同程度的耐药性。结论焦磷酸测序技术可快速对临床分离菌产生的ESBLs耐药基因分型,具有准确、快速、实时和高通量等优点。     

产ESBLs革兰阴性菌的TEM、SHV、CTX-M基因分型研究

目的:检测本院临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌的TEM、SHV、CTX-M基因型特征。方法:双纸片法确定产ESBLs的临床分离菌,提取质粒DNA,PCR法扩增ESBLs的TEM、SHV、CTX-M基因片段,对临床分离的12株肺炎克雷伯菌,17株大肠埃希氏菌和16株铜绿假单胞菌,共45株革兰阴性菌进行TEM、SHV、CTX-M基因分型研究。结果:本院临床分离出的45株产ESBLs临床分离菌的质粒中,有36株扩增出TEM基因片段,33株扩增出SHV基因片段,31株扩增出CTX-M基因片段,TEM、SHV、CTX-M基因片段的检出率分别为80%、74%和68%。结论:TEM、SHV、CTX-M已成为本院临床分离产ESBLs菌的主要耐药基因型,有必要进一步加强临床耐药基因的监测,为临床用药和医院感染监控提供参考。     

肝靶向药物EVk在大鼠组织中的分布研究

目的 研究合成表阿霉素与Vk3的偶联物(EVk)的组织分布情况.方法 经同位素示踪法和HPLC法观察EVk在动物组织中的分布.结果 同位素示踪法中,肝脏有一过性浓集现像,但未见特异性高药物浓度分布.结合HPLC检测到保留时间1.9、5.1 min处有两个较高的未知吸收峰,推测未知吸收峰应为EVk的肝代谢产物,肝组织较其...