用免疫荧光法和ELISA检测汉坦病毒感染后血清以鉴定病毒的血清型

作者用间接免疫荧光试验(IFA)和两种ELISA检测来自荷兰或比利时的27例病人血清样品中的汉坦病毒(HV)抗体,以确定病毒的血清型。取11例因接触实验室大鼠和16例可能接触野生啮齿动物而感染HV的病人血清,分别与感染了不同血清型代表株的Vero-E6细胞的上清液反应测定荧光抗体,以能获得清晰荧光结果的病人血清最高稀释度作为其抗体滴度。结果发现因接触实验室大鼠而感染HV的11份病人血清中抗Ⅰ和Ⅱ型HV抗体滴度相同且高于抗Ⅲ和Ⅳ型HV抗体滴度,而因接触野生啮齿动物而感染HV的16份病人血清中抗Ⅲ型HV抗体滴度均     

流感疫苗病毒株在MDCK细胞中的培养条件

 目的   研究4价流感疫苗所用病毒株在MDCK细胞中的扩增条件。方法 在6孔细胞培养板中以不同感染复数（multiplicity of infection,MOI）（0.100 0、0.010 0、0.001 0、0.000 1）和对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮（TPCK）-胰蛋白酶（胰酶）浓度（0、2、4、8 μg/ml）进行病毒接种和扩增,感染后72 h收获细胞上清液,检测病毒血凝素效价,确定病毒最佳扩增条件。随后,在搅拌瓶中进行MDCK细胞微载体悬浮培养,研究不同起始细胞接种密度（1.5×10⁵、2.0×10⁵、3.0×10⁵ 个/ml）和微载体浓度（3、5、10 g/L）对MDCK细胞生长的影响,确定细胞最佳扩增条件。根据确定的最佳扩增条件,在搅拌瓶培养体系中扩增4种病毒。结果 6孔板中4种流感病毒的最佳接种条件分别是,A/Michigan/45/2015(H1N1) pdm09：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度2 μg/ml;A/Hongkong/4801/2014(H3N2)：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml;B/Brisbane/60/2008：MOI 0.001 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml;B/Phuket/3073/2013：MOI 0.010 0、TPCK-胰酶浓度4 μg/ml。在搅拌瓶中以3.0×10⁵ 个/ml初始细胞密度接种,3 g/L微载体浓度培养,MDCK细胞能够实现较好的扩增,最高密度可达2.1×10⁶ 个/ml;搅拌瓶悬浮培养,以最佳接种条件接种后,4种病毒的血凝素效价为：6.75~8.42log₂ 血凝素单位/50 μl。结论   通过摸索病毒接种最佳MOI、TPCK-胰酶浓度及优化MDCK细胞微载体悬浮培养条件,能够在MDCK细胞微载体悬浮培养体系中有效扩增4价流感疫苗用病毒株,为后期工艺放大研究奠定基础。     

阻断型抗人IgE单克隆抗体的制备及其表位分析

目的 利用基因重组抗原免疫小鼠,制备抗人IgE单克隆抗体,研究其特异性和功能.方法 用表达的重组人IgE-Fc免疫BLAB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以间接ELISA法筛选杂交瘤上清.用ELISA阻断分析鉴定其生物学功能;通过丙氨酸突变扫描分析确定其抗原表位.结果 利用杂交瘤技术获得了1株抗人IgE的单克隆抗体178,它具有IgE抗体特异性反应,其识别的抗原表位位于IgE与其受体结合的关键部位.经鉴定其具有体外阻断IgE与其受体结合的活性.结论 利用基因重组抗原制备了1株抗人IgE的单克隆抗体178,此单克隆抗体具有体外阻断IgE与其受体结合的生物活性.     

斯洛伐克病人血清中东部型和西部型肾综合征出血热抗体的检测

业已证实,东部型肾综合征出血热(HFRS)发生在远东地区,而西部型HFRS发生在欧洲。为了了解斯洛伐克是否亦存在东部型HFRS,作者使用间接免疫荧光(IFA)和血凝抑制(HAI)试验对病人血清进行了抗体测定。用Fojnica病毒(属东部型HFRS病毒)感染乳鼠后,再经丙酮-蔗糖法提取作为抗原用     

婴儿皮内接种脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫应答

在最近的一次对口服脊髓灰质炎活疫苗(OPV)和脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)的重新评价中,IPV的优点(特别是在发展中国家)已受关注,但IPV价格比OPV贵。为了降低成本,作者采用皮内接种小剂量IPV的方法。一项早期研究发现,给已免疫过的成人和儿童皮内接种小剂量IPV可诱导显著的加强抗体应答。本文作者报道对初次皮内接种IPV的免疫应答的初步研究结果。