抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究

目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础。方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GV期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量。同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态。结果 RB1在小鼠GV期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GV期的2倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化。GV期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化。结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GV～MⅡ)中尚未发生甲基化。     

受精调控机制的研究进展

人类和哺乳动物的受精机制是近年来的研究热点.通过生物化学、转基因和基因敲除等研究得出的受精机制主要分为4个部分：①精子获能;②精子结合至卵子透明带;③精子与透明带结合诱发顶体反应（AR）;④精子与卵子的结合和膜融合.笔者拟就近期研究阐明的精子获能、AR及精、卵融合的新信息、新观点,进行综述如下.     

不同宫腔灌注方法对种植失败患者冷冻周期妊娠结局影响的研究

目的探讨胚胎患者种植失败大于等于2次后冻融胚胎移植(FET)前行宫腔内灌人绒毛膜促性腺激素(hCG)、集落刺激因子、单核细胞、生理盐水对妊娠结局的影响,得出最佳的宫腔灌注方法。方法使用随机对照单盲方法,选择既往胚胎RIF行FET作为研究对象,移植前2-3日行宫腔内灌注hCG?为hCG组A(67人),灌注集落刺激因子(G-CSF)组B(52人),单核细胞组C(20人),组A、B、C作为实验组,生理盐水组D(52人)为安慰剂组,未灌注组E(59人)为对照组。然后比较各组着床率、临床妊娠率、流产率、继续妊娠率等。结果临床妊娠率分别是:58.20%、53.84%、55.00%、53.84%、35.60%;继续妊娠率分别为:50.74%、50.00%、50.00%、44.23%、25.42%;流产率分别为:12.85%、7.14%、9.09%、17.85%。3组实验组和安慰剂组的继续临床妊娠率与对照组相比显著性增高,差别具有显著性差别,P0.05,其中hCG组妊娠率最高。G-CSF组流产率与对照组相比显著性降低,余4组的流产率相似。结论 FET前行宫腔内灌注,各种方法均可以提高患者的临床妊娠率。其中宫腔灌注操作对子宫内膜起的机械刺激的作用,也起到重要的作用。     

血清25-羟维生素D与精液质量相关性研究

目的探讨血清25-羟维生素D(25-OHD)水平与精液参数之间的关系。方法测定2 023例行体外受精-胚胎移植助孕的健康男性血清25-OHD水平,按其水平分为5组:A组109例,25-OHD 50 nmol/L; B组485例,50 nmol/L 25-OHD≤70 nmol/L; C组664例,70 nmol/L 25-OHD≤90 nmol/L; D组434例,90 nmol/L 25-OHD≤110 nmol/L; E组331例,25-OHD≥110 nmol/L。禁欲3～7 d后手淫法获取精液标本,应用精子质量分析仪(CASA)检测精子,按《WHO人类精液检查与处理实验手册》第5版要求检测精子形态。比较各组年龄、精子浓度、前向运动精子总数、存活率、精子正常形态百分率。结果各组年龄、精子浓度、前向运动精子总数、存活率、精子正常形态百分率差异无统计学意义(P均 0. 05)。结论在柳州地区,血清25-OHD水平可能与精液质量无关。     

抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响

目的 研究抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响,为进一步优化卵母细胞体外成熟培养体系提供理论依据. 方法 对照组采用基础体外培养液,共培养101枚GV期小鼠卵母细胞;实验组采用基础体外培养液+0.6 mmol/L半胱氨酸,共培养115枚GV期小鼠卵母细胞.观察两组卵母细胞的成熟率、谷胱甘肽的含量和线粒体内膜电位. 结果 对照组和实验组卵母细胞的成熟率分别为68.3％和80.0％,差别具有统计学意义(P＜0.05)；对照组和实验组卵母细胞平均谷胱甘肽含量分别为0.48±0.6 μg/L和0.51±0.5 μg/L,实验组谷胱甘肽含量略高,但两者无统计学差异(P＞0.05).线粒体内膜电位,对照组与实验组分别为0.04±0.003 △Ψm与0.39±0.020△Ψm,实验组线粒体内膜电位明显高于对照组(P＜0.05). 结论 抗氧化剂半胱氨酸对体外培养小鼠卵母细胞成熟有一定的促进作用,并可能会提高卵母细胞的发育潜能.     

孕酮受体在人子宫内膜基质细胞蜕膜化过程中的作用机制研究现状

人子宫内膜基质细胞蜕膜化(hESCD),是人类胚胎植入和维持妊娠的关键环节。hESCD主要是指排卵后,子宫内膜在孕酮与孕酮受体(PGR)作用下,发生一系列生物学、形态学改变及细胞外基质重建。但是,对于孕酮-PGR信号通路在hESCD过程中的具体分子作用机制,迄今尚未阐明。笔者拟就PGR结构及其亚型,hESCD过程中孕酮-PGR信号通路的生理作用、网络调控,以及PGR水平及其功能异常与hESCD异常疾病关系4个方面的最新研究进展进行阐述。     

GnRH-a联合少量HCG诱发排卵在多囊卵巢综合征患者中的应用初探

目的:研究GnRH-a与HCG联合诱发排卵在多囊卵巢综合征中的应用情况,为多囊卵巢综合征患者探讨有效的诱发排卵方案。方法:把多囊卵巢综合征患者随机分为三组:A组(31人)使用GnRH-a诱发排卵,B组(35人)使用HCG诱发排卵,C组(30人)GnRH-a与少量HCG联合诱发排卵,分别比较各组的年龄、基础FSH水平、排卵成功率、临床妊娠率、流产率等。结果:三组一般临床资料基本相同,三组排卵成功率分别为80%、76%、90%,;临床妊娠率分别为16.1%、20%、30%;OHSS率分别为:0%、14.3%、0%;流产率分别为:20%、0%、0%。A组的临床妊娠率最低,且流产率较其它两组高;然而B组多胎率、OHSS率较高。C组排卵成功率、临床妊娠率均较其他两组高。结论:在多囊卵巢综合征患者中使用GnRH-a与HCG联合诱发排卵可以获得较高临床妊娠率,较低的流产率,降低OHSS率,且有提高排卵率的趋势。     

右侧卵巢排卵左侧输卵管妊娠1例

患者32岁,女性。因“拟再次妊娠”于2012年8月1日于广西壮族自治区柳州市妇幼保健院门诊就诊。病史采集：G2 P0,平素月经规则,周期为30 d。2年前因左侧输卵管妊娠行腹腔镜下输卵管切开取胚术,术后使用避孕套避孕。因拟再次妊娠于本院门诊行自然周期监测排卵。月经周期第10天（2012-08-05）行阴道彩色多普勒超声检查结果示：子宫大小正常,子宫内膜厚为7 mm,呈 B 型,右侧卵巢查见较大卵泡（12 mm×11 mm）;第13天（2012-08-08）再次行阴道彩色多普勒超声检查结果示：子宫内膜厚为8 mm,呈 B 型,右侧卵巢见较大卵泡（15 mm×13 mm）,嘱其于7 d 内同房2~3次;第15天（2012-08-10）行阴道彩色多普勒超声检查结果示：子宫内膜厚为10 mm,呈 B 型,右侧卵巢可见较大卵泡为（17 mm ×16 mm）;第16天（2012-08-11）行阴道彩色多普勒超声检查示：子宫内膜厚为12 mm,呈 B 型,右侧卵巢可见较大卵泡（21 mm×18 mm）,左侧卵巢卵泡均小于8 mm×8 mm,如图1A所示,查血结果示促黄体激素（luteotrophic hormone,LH）为20.6 mIU/L,雌二醇（estradiol,E2）为285.2 pg/mL;第17天（2012-08-12）行阴道彩色多普勒超声检查结果示右侧卵巢优势卵泡已排。     

口服避孕药预处理在体外受精-胚胎移植促性腺激素释放激素拮抗剂方案使用中的临床应用

目的比较分析体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期应用促性腺激素释放激素(GnRH-ant)拮抗剂方案中用或未用口服避孕药(达英-35)预处理患者的临床特征和治疗结局。方法回顾性分析252个IVF-ET移植周期,分为3组,A组:116例,达英-35预处理GnRH-ant方案移植周期组;B组:46例,未用达英-35预处理GnRH-ant方案移植周期组;C组:90例,GnRH-a长方案移植周期组。比较各组患者的年龄、促性腺激素(Gn)使用天数和剂量、HCG日LH水平、取卵日内膜厚度、可用胚胎率、临床妊娠率等。结果 A组平均年龄(30.9±0.8)较B组(33.9±1.7)年轻,有显著性差异(P0.05);A组Gn使用天数和用量比B组多,但无显著性差异(P0.05);A组HCG日LH水平和取卵日内膜厚度均较B组显著减少(P0.05);A组与B组的可用胚胎率无显著性差异(P0.05);A组临床妊娠率(18.1%)较B组(37.0%)显著下降(P0.05);B组临床妊娠率(37.0%)与C组(38.8%)相比较无显著性差异(P0.05)。结论在IVF-ET治疗中应用口服避孕药预处理GnRH-ant方案,妊娠率显著下降,但未用口服避孕药预处理的GnRH-ant方案,能获得满意的临床结局。