睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究

目的 探讨在体睾丸生精小管注射合并体内电穿孔建立转基因小鼠的可行性.方法 将两种不同处理的转染液分别注射到4组SPF级雄性昆明小鼠睾丸生精小管内,然后对同一种转染液注射的两组动物中的一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;2周后各组SPF级雄性昆明小鼠分别与超排处理的SPF级雌性昆明小鼠合笼交配,最后对各组新生仔鼠进行PCR-Southern检测.结果 PCR检测,四组之间存在显著差异(P＜0.01),并且以A组最高(45%);Southern blotting检测,4组之间差异不显著(P＞0.05),但A组的整合效率(25%)仍高于其他3组.结论 运用在体睾丸生精小管内注射合并体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因的转染效率,该方法是否可广泛用于生产转基因动物还有待于进一步深入研究.     

体内原位电穿孔致雄性SPE KM小鼠睾丸损伤的实验研究

目的利用电穿孔仪对成年雄性SPFKM小鼠睾丸进行电穿孔实验,以观察电穿孔对成年雄性SPFKM小鼠睾丸的损伤,为体内精子介导基因转移提供依据。方法设置高压和低压两组不同的体内电穿孔参数,将SPFKM小鼠睾丸置于电穿孔仪上的钳型电极的两侧进行体内电穿孔,2周后处死动物,分离睾丸和附睾,将睾丸称重后用4%多聚甲醛固定,常规组织切片和HE染色,显微镜下观察;将附睾置于M16培养基中分离其中精子,稀释后置显微镜下观察。结果(1)高压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:高压电穿孔可造成睾丸的不可逆损伤;其睾丸质量也显著低于对照组睾丸质量(P<0.01)。(2)低压电穿孔2周后,附睾精子活力检查和睾丸组织切片镜下观察显示:低压电穿孔虽可造成睾丸一定的损伤,但这种损伤是可逆的,经过一段时间的恢复后雄鼠仍具有生殖能力。并且电穿孔后的睾丸质量与对照组睾丸质量不存在显著差异(P>0.05)。结论合理地设计体内电穿孔参数,一方面不会对SPFKM雄鼠睾丸的生殖能力造成严重影响,另一方面它还可为外源基因导入到生殖细胞提供了一种可能。