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目的 研究青蒿琥酯(artesunate,AS)通过增加小鼠巨噬细胞的自噬水平进而上调其杀菌活性的药理作用及机制.方法 分离及体外分化培养获得原代小鼠骨髓巨噬细胞.细菌计数实验分为大肠埃希菌(E.coli,EC)组、EC+ AS组和EC+AS+抑制剂组(3-MA和Ly294002),建立EC感染细胞模型,给予AS和抑制剂处理,采用平板培养法检测胞内活菌数量.自噬和活性氧检测实验分为medium组、AS组、AS+自噬抑制剂组和AS+活性氧清除剂组[还原型谷胱甘肽(GSH)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)],RT-PCR和Western blot法检测自噬体标志物的表达,荧光探针法检测胞内活性氧水平.结果 经定向分化后,获得形态良好的原代巨噬细胞.细菌计数实验结果显示,与EC组比较,EC+ AS组细胞胞内EC数量显著减少(P<0.01),且具有剂量和时间效应关系.EC+ AS+自噬抑制剂组和EC+AS+活性氧清除剂组细胞胞内细菌较EC+ AS组显著升高(P<0.01).自噬和活性氧检测结果显示,sAS组较medium组自噬基因LC3B和Atg5的mRNA和蛋白表达均明显升高,且具有剂量效应关系(P<0.01).AS+自噬抑制剂组或AS+活性氧清除剂组自噬蛋白的表达较AS组明显降低,AS+活性氧清除剂组ROS水平较AS组也显著降低(P<0.05).结论 青蒿琥酯能够增加巨噬细胞的杀菌活性,且该作用与其上调细胞活性氧水平,进而激活细胞自噬效应有关. 相似文献
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目的 原核表达抗菌肽葛佬素,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法 应用pET原核表达系统进行目的 蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用鲎试剂法,对表达产物的生物活性进行初步鉴定。结果 体外表 达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,鲎试剂检测结果表明,该表达产物对LPS有明显的 中和活性。结论 在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素。 相似文献
3.
观察人工设计葛佬素的cDNA序列表达产物是否具有抗菌及中和内毒素作用。方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质的cDNA序列氨基酸的偏爱密码子,并以此为基础设计葛佬素的cDNA序列,将合成的葛佬素cDNA插入真核细胞表达载体pCDSI中后转染COS-7细胞,对转染的COS-7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性的检测。 相似文献
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目的:脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素(LPS)是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过6年的应用评估,其疗效已被否定,迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法:以LPS活性中心LipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子,进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷,通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用;RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响;ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264.7细胞产生细胞因子(TNF—α)的抑制作用;观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果:京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用,并呈现出较好的剂量效应关系:同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264.7细胞的活化(TLR4和TNF-αmRNA的表达下调,细胞因子TNF-α的产生减少);在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平;对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。 相似文献
5.
目的 探讨不同寡核苷酸骨架对OG—寡核苷酸CpG ODNs导致小鼠死亡、诱导细胞因子释放能力的影响。方法 实验前1h经腹腔注射600mg/kgD-氨基半乳糖敏化小鼠,采用磷酸硫化CpG-寡核苷酸(PsC GDN)、Ps non-CpG ODN、磷酸二酯CpG—寡核苷酸(Po CPG ODN)和Po non-GOE ODN腹腔注射小鼠,注射剂量为每只小鼠10nmol,观察7d内小鼠死亡率的差异。体外培养THP-1细胞系,在THP-1细胞培养体系中加入上述制剂后,37℃、5%C02孵箱中培养20h后离心取上清,测定上清中TNF-α、IL-6、IL-12的浓度。同时观察CpG ODN刺激THP-1细胞4h后TLR9的表达情况。结果 Ps CpG ODN可诱导小鼠的死亡以及细胞因子的大量释放,而其它三种制剂则无此能力;而且Ps CpG ODN诱导TPG—α释放的能力随浓度的增加而增加;CpG ODN导致的细胞TLR9的表达增加与细胞因子的释放密切相关。结论 磷酸硫代骨架的CpG ODN具有导致动物死亡和诱导巨噬细胞大量释放细胞因子的作用,磷酸二酯骨架的CpG ODN则无此能力。 相似文献
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黄芩抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 从黄芩中提取具有拮抗内毒素(LPS)活性的物质.方法 采用大孔吸附树脂和高效液相色谱(HPLC)等技术将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心Lipid A的结合活性,动态比浊法鲎试验检测各组分(2.0 mg/L)对LPS(02 μg/L)的中和作用,籍此筛选出活性组分;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测所筛组分对LPS诱导的RAW264.7细胞的Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响,ELISA法检测所筛组分对LPS(100 μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子的影响.结果 获得5种HPLC产物S3K1~5,其中S3K1与Lipid A结合活性最高,S3K1(2.0 mg/L)可显著抑制LPS(0.2 μg/L)介导的鲎试剂的凝结反应(P<0.05);以LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞,其TLR4 mRNA表达增强,给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后能减弱LPS诱导RAW264.7细胞的TLR4 mRNA表达(P<0.05);单纯LPS刺激RAW264.7细胞释放的TNF-α为(1 757.61±207.25)ng/L(对照组),给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后TNF-α浓度依次为(1324.53±149.73)、(893.87±140.77)、(799.97±124.21) ng/L,随S3K1剂量递增而减低,均显著低于对照组(P<0.05).结论 从黄芩中提取到具有拮抗LPS活性的组分S3K1,S3K1在体外对LPS具有一定的中和作用,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的,TLR4 mRNA表达,进而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化. 相似文献
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拮抗细菌DNA的CpG-N ODN筛选 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 在抑制性CpG寡核苷酸(CpG-N ODN)分子设计的基础上,选择部分序列加以合成并对其生物学活性进行鉴定,筛选出能够拮抗细菌DNA的CpG-N ODN.方法 对合成的10条CpG ODN进行生物学活性的初筛和复筛,观察其自身的刺激性及其对CpG-S ODN诱导的TNF-α释放的抑制作用.使用RNAstructure version 3.71预测CpG ODN的二级结构及自由能,根据10条CpG ODN构效关系分析结果,对CpG-N ODN分子进行再设计,并从中选择11个序列进行生物活性的筛选.结果 首次合成的10条CpG ODN仅1条是对细菌DNA拮抗作用较弱的CpG-N ODN.通过对其构效关系进行分析,推测CpG ODN的生物活性可能与自由能相关.在此基础上对CpG-N ODN分子进行了再设计,合成的11条CpG ODN中有5条是拮抗作用较强的CpG-N ODN.结论 获得了6条CpG-N ODN.CpG ODN的生物活性可能与自由能密切相关. 相似文献
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目的:探讨青蒿琥酯(AS)对盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症小鼠的保护作用及其可能机制。方法:采用CLP制作小鼠脓毒症模型,术后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察7d内CLP小鼠的死亡率;检测术后4、8h血浆脂多糖(LPS)、TNF-α、IL-6水平;术后8h小鼠肺脏组织形态的变化。结果:AS明显降低CLP小鼠的死亡率(P<0.05)及血浆LPS、TNF-α和IL-6水平(P<0.05或P<0.01),减轻肺组织的损伤。结论:AS对CLP小鼠具有显著的保护作用,该作用可能与其降低血浆LPS水平、减少促炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放和减轻组织脏器的损伤有关。 相似文献
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芘荧光探针法结合曲线拟合研究胆盐-磷脂混合纳米胶束的聚集行为 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究不同磷脂比例的胆盐-磷脂混合纳米胶束的聚集行为。方法以芘为荧光探针,测定不同磷脂比例的胆盐-磷脂混合纳米胶束增溶芘后的荧光光谱,以I1/I3值(I1=372 nm,I3=383 nm)为纵坐标、胶束浓度对数值logC为横坐标,利用Origin8.0软件进行曲线拟合,以S型曲线的突变中点切线和平行切线的交点定义临界胶束浓度。结果磷脂/胆盐比例(W/W)为2∶1,1∶1,1∶2的混合胶束临界胶束浓度分别为0.034,0.048,0.055 g/L。结论提高混合胶束中磷脂比例,可以减小胶束的临界胶束浓度,有利于胶束发挥更大的增溶作用。 相似文献