四条分子进化规律及其分子进化学说的证据、预测与验证

军事医学科学院放射医学研究所研究员贺福初、吴祖泽等完成了四条分子进化规律及其分子进化学说的证据、预测与验证的研究。本研究在国际上首次总结出四条分子进化规律:造血生长因子的发育相关进化、细胞因子与受体的协同进化、cDNA编码区与非     

小鼠胚胎成纤维细胞差异表达基因的筛选

应用微阵列杂交法对培养前，后的小鼠胚胎成纤维细胞（MFF）mRNA进行检测，找到24类差异表达的基因，为进一步筛选MEF可能表达的新基因，对培养前（driver)，后（tester)的MEF mRNA进行抑制性消减杂交，产物与pGEM-T载体连接构建cDNA削减文库并转染JM109大肠杆菌。随机挑取阳性克隆，PCR扩增后对所得的差异表达基因进行测序及生物信息学分析。在随机挑取的145个克隆中，测得了128条EST序列，经生物信息学分析，它们代表了42类不同基因和3条新基因序列。结果表明，培养后MEF相对于培养前胚胎成纤维细胞确实存在差异表达基因群。提示，进一步的实验研究可能找出对ES细胞增殖分化有重要调控作用的基因或基因群。     

人源新基因hGlyrichin的克隆及其功能的初步研究

目的：克隆获得与mL52新基因（GenBank：AY028425）同源人类新基因hGlyrichin，并研究其功能。方法：采用PCR法从人胎肝cDNA文库中扩增出该新基因，因富含甘氨酸而命名为hGlyrichin，以RT—PCR和Northem杂交分析在多种细胞株中的表达及转录本大小，并对该基因进行生物信息学分析，利用pE他2b表达载体构建重组质粒pET22b-hGlyrichin，转化大肠杆菌BL-21（DE3）中进行IPTG诱导表达。结果与结论：电子PCR证实该基因定位于人染色体20q11．22，包含3个外显子和2个内含子。Northern杂交结果显示为单一转录本，大小约600bp，与mL52全长cDNA长度相符。所编码的蛋白为含有疏水区的小分子阳离子蛋白，相对分子质量和等电点分别为8182．83和9．58，二级结构（Garnier-Robson模型）预测是以B折叠型为主，这些特点与目前已知的大多数阳离子抗菌肽的结构及部分理化特性极为类似，该基因转化后的大肠杆菌在IPTG诱导表达时的生长受到明显抑制，初步证实了hGlyrichin具有明显的抗菌活性。     

长期培养后小鼠造血基质细胞差异表达基因的筛选

为了进一步研究长期培养体系（long-term culture,LTC)中造血基质细胞调控造血的分子基础及其作用机制，并发现新型造血调控因子，以LTC体系培养后小鼠髓髓造血基细胞（LTC－St)为被扣除杂交组，以未经培养的小鼠骨髓细胞（BMC）为扣除杂交组，3用抑制性扣除杂交法（SSH）进行杂交，将杂交产物克隆并测序，进行生物信息学分析，结果：获得了131个差异表达EST克隆，这些克隆代表了26种已知或部分已知的不同基因和7条无任何线索的全新基因，5条具有完整开放阅读框架，无功能线索的新基因中3条有信号肽。结论：通过本实验得到了LTC体系中特异性表达的一个消减库，获得了几条可能与造血调控相关的新型基因或EST，为揭示造血微环境支持造血的分子机制提供了有意义的线索。     

HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定

目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞,本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物;利用基因重组技术,构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ,将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中,命名为ｐＵＣ－ＩＬ６,并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证,为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。