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目的 验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性.方法 把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性;另外构建了TRIM69基因的全长、RING结构域的点突变、以及RING结构域截短序列的真核细胞表达载体,瞬时转染293T细胞或稳定表达泛素的HeLa细胞株,通过免疫沉淀结合免疫印迹方法检测其是否具有催化多聚泛素链形成的活性.结果 泛素化分析实验表明TRIM69具有催化多聚泛素链形成的活性并且其活性依赖于它的RING结构域.结论 成功鉴定了人源TRIM69蛋白具有催化多聚泛素链形成的活性,为进一步证明其是一个新的E3泛素连接酶提供依据. 相似文献
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