非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

HBV DNA及HBxDNA亚片段在肝癌细胞内的整合及作用

为探讨ＨＢＶＤＮＡ及其亚基因片段ＨＢｘＤＮ在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）中整合特点用机制，制备了地高辛标记的３．２ｋｂＨＢＶＤＮＡ全基因及０．５９ｋｂＨＢＶＤＮＡ／ＢａｍＨＩ，ＢｇｌⅡＢＨｘＤＮＡ亚基因探针。点杂交、原位杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测ＨＢＶＤＮＡ的存在情况，筛选ＨＢＶＤＮＡ纯整合标本，以ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢｘＤＮＡ在ＨＣＣ染色体的整合。结果显示ＨＢＶＤＮＡ在肝细胞内以核型为主（７０％）     

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

目的: 探讨抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)大鼠肾小球内C5b-9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如:一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。 方法: 大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b-9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析;并对有C5b-9包绕的肾小球系膜细胞(MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶(iNOS) mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)及TNFα的排泄量。 结果: ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生,病变早期(溶解时相)补体C5b-9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面;随着病程的进展,被C5b-9包绕的MC逐渐减少, 病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的 iNOS mRNA表达, 尿液中NO^-₂／NO^-₃ 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段(一般7 d后),上述指标的变化逐渐趋缓。 结论: ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b-9沉积及NO和TNFα的合成与释放有一定关系。     

HBV相关肝细胞癌中HBV亚基因整合与表达研究

目的 探讨乙型肝炎病毒亚基因在肝细胞癌发生中的作用。方法 以BamH I、Bgl Ⅱ酶切32kb HBV DNA，回收其HBs、HBx、HBc、PreS亚基因片段，以地高辛甙元标记成探针。以HBV探针Southern杂交分析其存在状态，以HBV亚基因探针Northern杂交检测亚基因转录。结果 HBV阳性肝细胞癌中，整合型与混合型标本分别为63．6%和36．4％，纯整合型标本中，PreS、HBs、HBx、HBc mRNA阳性率分别11．1％、44．4％、55．6％、11．1％。结论 HBV DNA以整合于染色体上作为存在的主要方式，整合的HBV DNA有一定程度的转录，可指导相应蛋白合成而影响肿瘤的发生。     

补体C5b-9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验研究

观察人血清补体C5b 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)表达诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的影响。方法 :首先提取人血清补体C5b 9复合物 ,然后用人C5b 9复合物刺激培养的大鼠MC ,检测MC在受C5b 9复合物刺激后3、6、2 4和 48h时iNOSmRNA的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮 (NO)代谢产物———硝酸根 (NO3- )和亚硝酸根(NO2- )含量的变化。结果 :用人C5b 9复合物刺激培养大鼠的肾MC能使其表达iNOSmRNA ,培养上清液中NO3- NO2- 含量也明显升高。人C5b 9复合物对MC的刺激作用能部分被相应的抗人C5b 9复合物抗体和RNA合成抑制剂———放线菌素D所抑制。结论 :人补体C5b 9复合物具有刺激大鼠肾MC合成NO的作用。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

HBV亚片段基因探针的制备及其在肝癌研究中的应用

以ＥｃｏＲⅠ酶切质粒ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶＤＮＡ，回收ＨＢＶ３．２ｋｂＤＮＡ，继以ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切ＨＢＶ－ＤＮＡ，回收ＨＢｓ０．９ｋｂ及ＨＢｘ０．５８ｋｂＤＮＡ片段。以地高辛随机引物法标记上述回收片段，获得高度敏感性及特异性的ＨＢＶ全基因及亚片段基因探针。以ＨＢＶ全基因探针通过斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测了４４例肝细胞性肝癌组织标本中ＨＥＶ－ＤＮＡ的存在情况及存在特点，继以ＨＢｓ、ＨＢｘ亚基因探针检测了ＨＥＶ纯整合型肛癌标本中各亚基因片段的整合情况。结果显示：７５％肝癌组织中有…     

TH细胞在记忆性CTL介导的肿瘤抑制中的作用研究

目的 观察记忆性CTL的抑瘤作用是否需要抗原特异性TH细胞的辅助。方法 表达OVAT细胞表位SIINFEKL特异性TCR的T细胞转输RAG^-l-小鼠，经相应T细胞表位多肽刺激后产生记忆性CTL，将此记忆性CTL转输已产生特异性和非特异性TH细胞的C57BL／6小鼠体内并接种肿瘤细胞EG7。结果 经T细胞表位多肽免疫后，SIINFEKL特异性TCR T细胞成功在RAG^-l-小鼠体内增殖并分化为记忆性CTL；抗原特异性TH细胞可辅助产生较多效应性CTL但并没有完全的肿瘤抑制作用；记忆性CTL的完全抑瘤活性需要抗原特异性TH细胞的辅助。结论机体对肿瘤的长期完全杀伤作用不但需要肿瘤特异性抗原诱导产生的记忆性CTL，而且需要特异性TH细胞的辅助，肿瘤疫苗的设计必须包括特异性的CTL表位多肽和辅助性TH细胞多肽。     

慢性乙型肝炎患者肝组织,淋巴细胞内HBV—DNA的检测及相关…

用分子生物学方法检测了乙型肝炎３７例的血清，外周血淋巴细胞及肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ存在情况，阳性率分别为５７．１％，８７．１％和８３．８％，统计分析表明，血清与外周血淋巴细胞，血清与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异有显著性（Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．０５），外周血淋巴细胞与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率的相关系数是０．８１（Ｐ〈０．０５），提示外周血淋巴细胞与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ有一定的相关性