Survivin在MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡过程中的作用

目的探讨存活素(Survivin)能否抑制(1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP~+)诱导的神经元(SH-SY5Y细胞)的凋亡过程。方法运用1 mmol/L MPP~+处理SH-SY5Y细胞,诱导其发生凋亡,建立帕金森病的细胞模型,采用不同浓度的Survivin进行预处理,使用倒置显微镜观察细胞形态,采用MTT法、Real-time PCR、Western blot检测相关指标,进而评价Survivin对SH-SY5Y凋亡的作用。结果 1 mmol/L MPP~+作用24 h可诱导SH-SY5Y的凋亡,显著降低细胞存活率(F=13.32,P=0.000)。MPP~+作用前,预先经Survivin处理2 h的SH-SY5Y细胞的存活率显著提高(F=13.32,P=0.000,P=0.000,P=0.000),并呈剂量依赖性关系。Real-time PCR结果显示Survivin能够显著抑制SH-SY5Y细胞中凋亡蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达水平(F=61.57,P=0.000,P=0.000,P=0.000;F=54.26,P=0.001,P=0.000,P=0.000);Western blot结果亦显示Survivin能够显著抑制SH-SY5Y细胞中凋亡蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达水平。结论 Survivin能够剂量依赖性地抑制MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与阻断Caspase信号通路相关。     

肺癌组织中STR基因座变异规律的研究

背景与目的:在DNA水平进行个体同一认定及亲缘鉴定,是目前获得准确结论的最直接的方法,而短串联重复序列(short tandem repeat,STR)复合扩增荧光检测技术是目前应用最广泛的DNA技术.但已有研究表明STR基因座在肿瘤组织中会发生明显高于正常组织或血液的变异.该研究的目的为探索20个常染色体STR基因座及Amel基因座在人肺癌组织中的变异规律,为肺癌组织的个人识别及亲缘鉴定提供依据.方法:收集75例人肺癌组织和相对应的癌旁正常组织,采用组织DNA提取试剂盒提取DNA,MicroreaderTM 21 Direct ID System试剂盒进行PCR扩增,采用3130序列分析仪进行毛细管电泳,用Gene Mapper ID V3.2基因分析软件进行基因分型.结果:75例癌组织中有24例发生了STR位点的变异(32%),在21个常用STR基因座上共检出55次变异,其中等位基因增加10次,杂合性等位基因完全丢失10次,部分性丢失35次.D2S441、Penta E基因座未检出变异.结合目前实验结果与肺癌患者的临床资料分析,发现STR位点的变异与肺癌的分型、患者性别无联系(P>0.05),与肺癌的分期及患者年龄正相关,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:肺癌组织中STR基因座较常发生变异,并且变异更可能在年龄大、恶性程度高的肺癌中发生;该实验检出D2S441、Penta E基因座无变异,在今后的研究中可加大样本量,进一步验证可否将其纳入稳定的STR基因座,为肿瘤组织等特殊检材的鉴定提供依据.     

基于1H-NMR技术的SD大鼠弥漫性轴索损伤血浆代谢组学研究

目的：采用核磁共振氢谱（1H-NMR）结合模式识别的方法研究SD大鼠弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury,DAI）后血浆代谢的变化,探讨1H-NMR在DAI中应用的可行性,并筛选出DAI的早期差异代谢物。方法：采用改良的Marmarou A法建立SD大鼠DAI模型,分为打击致伤组（n=6）,假手术组（n=6,给予打击致伤组相同的打击前准备,但不予以打击）,于致伤后1 d抽取心血,分离出血浆。应用1H-NMR结合模式识别技术对大鼠血浆进行代谢组学分析,筛选差异代谢物。结果：通过对打击致伤组与假手术组血浆代谢组差异代谢物的相关性分析及独立样本t检验,筛选出相关系数丨r丨＞0.6且P＜0.05的差异代谢物。结果显示,与假手术组相比,打击致伤组血浆中丙酮酸（Pyruvate）（r=-0.831,P=0.019）、赖氨酸（Lysine）（r=-0.773,P=0.030）、谷氨酸（Glutamate）（r=-0.772,P=0.042）、谷氨酰胺（Glutamine）（r=-0.772,P=0.042）、异丁酸（Isobutyrate）（r=-0.631,P=0.045）、甘油（Glycerol）（r=-0.844,P=0.032）明显升高,丙二酸二乙酯（Malonate）（r=0.699,P=0.038）、L2（r=0.786,P=0.047）、L3（r=0.666,P=0.031）、L4（r=0.715,P=0.022）、L10（r=0.663,P=0.025）、β-葡萄糖（β-Glucose）（r=0.800,P=0.030）、α-葡萄糖（α-Glucose）（r=0.808,P=0.015）明显降低。结论：基于1H-NMR结合模式的方法对DAI后血浆的代谢组学分析是可行的,所筛选出的13种差异代谢物及其表达变化,不仅为进一步探索DAI的病理生理机制提供了新的研究基础;同时,对于临床DAI的早期诊断、治疗及法医学鉴定提供了重要的方法和依据。