CD3ζ链引入YRHQ基序可增强靶向HER2的CAR-T细胞的抗肿瘤活性

目的：探讨在靶向HER2的CAR的CD3ζ链胞内区引入YRHQ基序对CAR-T细胞的特异性杀伤活性及免疫记忆形成的影响。方法：通过DNA合成获得包含靶向HER2的编码抗原受体H28ζ或H28ζ(YRHQ)的DNA片段,通过慢病毒载体将不同CAR的DNA片段分别转导健康人外周血T细胞,制备靶向HER2的H28ζ-CAR-T及H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞。扩增过程中对不同CAR-T细胞进行计数,FCM检测CAR的表达率。将CAR-T细胞分别与HER2阳性的SKOV3、MDA-MB-453或HER2阴性的MCF-7细胞共培养,LDH释放法检测其杀伤活性,ELISA法检测IL-2、IFN-γ和颗粒酶B的水平,WB法检测STAT3磷酸化水平及免疫检查点分子TIM-3和PD-1的表达,通过FCM检测CCR7、CD45RO的表达,分析CAR-T细胞的表型。结果：H28ζ-CAR-T和H28ζ(YRHQ)-CAR-T细胞扩增能力较好,体外培养7 d时扩增4～5倍。H28ζ-CAR和H28ζ(YRHQ)-CAR表达率分别为（33.3±2.85）%和（28.30±3.2）%。H28ξ(YRHQ)-...     

围绝经期和绝经后子宫内膜息肉局部雌孕激素受体的表达及意义

目的研究雌激素受体（estrogenreceptor,ER）、孕激素受体（progesteronereceptor,PR）在围绝经期、绝经后子宫内膜息肉及正常子宫内膜中的表达,探讨其在子宫内膜息肉发病中的意义。方法采用免疫组化sP法检测3组中ER、PR的表达;利用逆转录聚合酶连反应（RT—PCR）检测3组组织中ER、PR的转录水平。结果无论免疫组化还是RT—PCR结果均显示围绝经期及绝经后子宫内膜息肉组织中ER高于对照组（P〈0．05）,RT—PCR结果显示绝经后子宫内膜息肉组织中PR表达高于围绝经期息肉及正常对照组（P〈0．05）。结论围绝经期子宫内膜息肉发生可能与局部激素受体水平变化有关,其中雌激素受体起关键作用,提示绝经后子宫内膜息肉患者发病与局部雌孕激素受体水平升高均有关。     

A族链球菌(GAS)Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定

目的:对A族链球菌Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位.方法:以初步定位的表位区段为线索合成三段重叠多肽,dot-ELISA检测McAb2与合成肽的亲合力,并以McAb2为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,用竞争ELISA鉴定阳性克隆.结果:dot-ELISA检测结果表明Fba_(100-112)肽段与McAb2的结合能力最强.经过3轮亲和筛选后,随机挑选20个噬菌体克隆,竞争ELISA对其与McAb2的亲和力做检测,其中12个克隆显示较强的阳性结果.阳性克隆DNA测序,与Fba基因第100位氨基酸至110位氨基酸中ITPDL同源性较高.结论:通过dot-ELISA将A族链球菌Fba蛋白McAb2对应的表位定位于100～112位氨基酸,结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合.为进一步研制表位肽疫苗、研究Fba蛋白及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础.     

医学免疫学实验教学改革与探索

医学教育伴随着医学模式的转变,已经从传统的生物医学模式,逐步向现代的生物-心理-社会医学模式过渡。医学教育不仅是知识传授、答疑解惑,而应更注重操作实践和能力培养。实验教学是理论联系实际的纽带,是基础医学通往临床医学的桥梁。本课题组结合本科教学审核评估和临床医学专业认证工作的开展,牢固树立人才培养的中心地位,通过契合专业培养方案,开展分层实验教学;在实验教学内容优化配置,引入PBL实验教学模式;通过运用开放性实验教学方法并建立综合的实验考核评价体系发挥实验教学在培养学生的实际操作能力、综合分析能力、逻辑思维能力等方面的积极作用,取得了良好的效果。     

A族链球菌表面新发现蛋白Fba真核表达质粒的构建及其诱导的免疫应答

目的：构建新发现的A族链球菌（GAS）表面蛋白Fba的真核表达质粒,并将其以及Fba蛋白、M蛋白分别免疫小鼠,对它们诱导的体液免疫及细胞免疫应答进行评价分析。探讨Fba蛋白作为GAS候选疫苗的可能性。方法：以SSI-9菌株（GASM1血清型标准株）作为模板,采用PCR方法扩增Fba基因,测序正确后克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1/fba;将雌性CD1小鼠随机分成6组,分别为Fba蛋白免疫组、M蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba＋Fba蛋白免疫组、pcDNA3.1/fba免疫组、pcDNA3.1空质粒对照及PBS对照组。ELISA检测各免疫组血清IgG的动态变化水平;脾细胞增殖试验检细胞增殖水平,并用流式细胞术检测小鼠体内CD4＋、CD8＋淋巴细胞的变化。试验结果经SPSS10.0统计处理。结果：成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/fba;质粒或蛋白免疫后小鼠IgG产生水平以Fba蛋白免疫组增高最为明显,其次为Fba质粒蛋白混合免疫组及Fba质粒组。特异性抗原诱导后体外脾细胞增殖试验显示：pcDNA3.1/fba免疫组增殖水平明显高于其它组,流式细胞检测结果与此一致,并显示以CD4＋T细胞水平升高为主,CD8＋T细胞水平在各组别之间也有一定的差异。结论：（1）Fba蛋白与M蛋白一样均能有效地诱导机体产生抗体,提示Fba蛋白很有希望成为GAS的候选疫苗。（2）成功构建了Fba蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/fba,且该重组质粒能有效地诱导抗链球菌所需的抗体,并能增强CD4＋T细胞、CD8＋T细胞的增殖功能。     

A族链球菌表面蛋白Fba单克隆抗体的制备及其对应表位的初步鉴定

目的：制备抗A组溶血性链球菌（GAS）表面蛋白Fba（fibronectin-binding proteins a）的单克隆抗体（mAb）,并对单抗的生物学功能及其相应表位进行了初步鉴定。方法：以重组Fba蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术及间接ELISA筛选出针对Fba的杂交瘤细胞株,以Western blot鉴定mAb的特异性,并将获得的mAb与Fba＋GAS和Fba-GAS分别行全菌ELISA、与Fba的分段表达蛋白行Western blot,初步鉴定mAb针对的表位所在区域。结果：获得了稳定分泌抗Fba-mAb的杂交瘤细胞株,其中一株mAb能特异结合天然Fba＋链球菌,且该单抗针对的表位包含了Fba蛋白的第104-108位氨基酸,该位点也是链球菌Fba蛋白结合补体调节蛋白FH的位点。结论：成功地制备了抗GAS表面Fba蛋白的mAb,其中一株mAb对应的表位为位于菌体表面的天然表位,并检测出了该mAb对应的表位所在区段,这为深入研究GAS的致病机制提供了有力工具。     

miR-155参与缺氧诱导的乳腺癌化疗耐药

摘 要：［目的］ 探讨miR-155在缺氧诱导的乳腺癌化疗耐药中的作用。［方法］ 以0、50、100、150、200μmol/L不同浓度CoCl2处理4T1细胞,建立缺氧模型。实时定量PCR检测缺氧条件下miR-155的表达与耐药基因BCRP的表达。通过慢病毒载体转染使miR-155过表达,通过caspase 3/9分光光度法探讨miR-155在缺氧环境下乳腺癌化疗耐药中的作用。［结果］ 随缺氧程度的增加,miR-155及BCRP基因表达增加,过表达miR-155可抑制阿霉素诱导的4T1细胞的凋亡。［结论］ 随着乳腺癌缺氧程度加重,miR-155表达逐渐增加,miR-155表达与乳腺癌化疗耐药相关。     

A族链球菌M蛋白相关疫苗的研究进展

A 族链球菌（group A streptococcus,GAS）也称化脓性链球菌,是最常见的也是致病性最强的革兰阳性菌之一,其可以引起多种感染性疾病如扁桃体炎、急性咽炎、喉炎、风湿热、猩红热及严重的毒性休克综合征。值得关注的是 GAS感染后还可以导致严重的变态反应性疾病如风湿性心脏病、急性肾小球肾炎等。国内外从来没有停止过对 GAS疫苗的研究,主要聚焦于免疫原性强的 M蛋白,现就以M蛋白为基础的疫苗研究进展综述如下。     

人LIGHT胞外区基因的克隆及融合蛋白的表达

目的：克隆人LIGHT胞外区基因（hsLIGHT），构建其原核表达质粒，并诱导其在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法：采用RT-PCR方法从HL60细胞中扩增hsLIGHT，将其克隆人原核表达质粒pGEX-4T-2，构建其重组表达质粒pGEX-4T-2／hsLIGHT，以不同浓度IPTG诱导表达，于不同时间经SDS-PAGE和Western blot分析、鉴定。结果：经RT-PCR扩增获得的hsLIGHT序列与Genebank报道的LIGHT基因胞外区序列完全一致；SDS-PAGE和Westernblot分析证实重组质粒可表达出相对分子量为47000的蛋白，与GST-hsLIGHT融合蛋白分子量一致。结论：成功完成了人LIGHT胞外区基因的克隆及其原核表达质粒的构建，在大肠杆菌E-coli BL21中经IPTG诱导表达了融合蛋白GST-hsLIGHT，为进一步探讨LIGHT的抗肿瘤生物学活性、探索肿瘤免疫治疗新方法奠定了基础。     

白念珠菌mp65基因真核质粒的构建及免疫原性研究

目的构建以白念珠菌甘露糖蛋白65(MP65)编码基因mp65为目的基因真核重组表达质粒,并对其免疫原性进行分析。方法PCR法自白念珠菌标准菌株ATCC64550中获取mp65基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1中,将真核表达经质粒大抽提并定量后免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体产生水平,流式检测细胞免疫。结果PCR法克隆出全长为1140bp的mp65基因,构建出pcDNA3.1-mp65真核表达质粒,pcDNA3.1-mp65免疫小鼠能诱导产生效价为1∶800的IgG抗体,同时诱导CD4+T和CD8+T细胞百分含量增高。结论白念珠菌真核表达质粒pcDNA3.1-mp65成功构建并能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫。