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1.
用机械物理方法与Sephadex G-200分子筛层析、DEAE-cellulose离子交换层析相结合,将多杀性巴氏杆菌(5:A)荚膜抗原粗提物(CE)分为P1、P2两种成份,并经免疫保护性试验证明:荚膜中含有保护性蛋白成份P1,P1分子量为129.1kD,且至少含分子量分别为46.7kD、42.6kD和39.8kD的3种蛋白亚基。  相似文献   
2.
本文应用抗鼻疽菌单克隆抗体(McAb)代替免疫动多价血清(PolyAb)作荧光抗体间接染色法(IFA)检测鼻疽菌。对McAb的敏感性特异性进行了测定,对一些疽鼻病料进行了检测,征明McAb对鼻疽菌的诊断敏感性高,特异性强,具有实际应用价值,可取代PolyAb,作为对鼻疽菌检测的一种新试剂。  相似文献   
3.
α毒素是A型产气荚膜梭菌所致严重创伤性气性坏疽的主要致死因素,至今尚无有效的防治方法,使用抗生素和多价抗毒素效果不明显t‘J。为此,我们采用细胞融合技术,制备了抗a毒素的单克隆抗体(InAb),为治疗气性坏疽患者的a毒素中毒提供可能性。互材料和方法1.l抗原和细胞a毒素抗原系重组菌株BLZI(DE3)(PXlryAI)的表达产物,按照表达系统十ET-28b(+)的操作手册进行提取。SpZ/0骨ff$细胞,由本室保存。且.2实验动物6周一百周龄*alb/C小鼠,由卫生部长春生物制品研究所提供。互.3抗a霉素mAb的制备动物免疫、细胞融合…  相似文献   
4.
用提取的A 型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原, 制备了1 株mAb 2E3 。其Ig 亚类为IgG3, 细胞培养上清和腹水的mAb 效价分别为1∶1024 和1∶108 。该mAb 2E3 可中和α毒素的磷脂酶C 活性和溶血活性, 对α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好的被动保护作用。另外, 应用RTPCR 技术, 从杂交瘤细胞株2E3 中, 扩增出mAb VH 和VL基因, 分别克隆至载体pGEMT中。序列分析证实, VH 基因为357 bp, 编码119 个氨基酸;VL 基因为324 bp, 编码108 个氨基酸。计算机分析表明,VH 和VL基因均为新发现的基因序列, 符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征。VH 和VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ( B) 和轻链κⅢ家族。  相似文献   
5.
将含A型产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pKMA100用核酸内切酶BamHI和HindⅢ双酶切,经电泳分离、透析袋电洗脱法回收了0.95kbα毒素基因片段,再将载体pET-28b(+)用BamHI和HindⅢ双酶切,然后将处理好的pET-28b(+)与0.95kb的α毒素基因片段进行连接、转化。经BamHI和HindⅢ酶切分析和序列分析,证明重组质粒pXETA1含有α毒素基因,且具有正确的阅读框架。构建的重组菌株BL21(DE3)(pXETA1)能表达α毒素,但已经完全丧失其毒性。经SDS-PAGE和薄层凝胶扫描分析,IPTG诱导后的BL21(DE3)(pXETA1)所表达的目的蛋白占菌体总蛋白的33.21%。经Westernblot分析和免疫试验结果表明,表达产物能被α毒素抗血清识别,且免疫小鼠后,用强毒株培养上清攻击,结果免疫小鼠能抵抗至少4LD100的攻击,这说明表达产物具有良好的免疫原性。  相似文献   
6.
用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素(PEA)受体结合区蛋白初步复性,复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制PEA的细胞毒性实验。将10ng/ml的PEA与其敏感细胞L929共孵育,36h左右可见细胞发生病变死亡,而同时加入复性的重组PEA受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加PEA阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖,这种PEA细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。由此可见,重组PEA受体结合区蛋白可在体外竞争抑制PEA对L929细胞的毒性,其作用机理有待进一步研究  相似文献   
7.
用机械物理方法与Sephadex G-200分子筛层析、DEAE-cellulose离子交换层析相结合,将多杀性巴氏杆菌(5∶A)荚膜抗原粗提物(CE)分为P_1、P_2两种成份,并经免疫保护性试验证明:荚膜中含有保护性蛋白成份P_1,P_1分子量为129.1 kD,且至少含分子量分别为46.7kD、42.6kD和39.8kD的3种蛋白亚基。 用CE免疫BALB/c小鼠,首次建立了2株抗P_1的单克隆抗体细胞1B和2B_7。特异性试验表明,所制备的McAb只与多杀性巴氏杆菌反应,而不与其他细菌交叉为特异性高、纯度高的单克隆抗体,对于多杀性巴氏杆菌病的诊断、流行病学调查及防治有一定的意义。  相似文献   
8.
用提取的A型产气荚膜梭菌α毒素包涵体免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合和克隆化,经ELISA筛选,共获得7株稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8、1C3、1D5、1D8、1F1、1H1和2E3。经鉴定,7株McAb的Ig亚类有IgG1(1D8)、IgG3(1A8、1C3和2E3)和IgM(1D5、1F1和1H1)。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为:1∶512~1∶1024和1∶106~1∶108。尤为重要的是,2E3杂交瘤细胞株分泌的McAb不仅能够中和α毒素的磷脂酶C活性和溶血活性,而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用  相似文献   
9.
本研究用纯化E.coliRecA蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以粗制E.coliRecA包被酶标反应板,间接ELISA方法筛选阳性孔,经有限稀释法4次克隆化,建立了两株分泌抗RecA蛋白McAb的细胞系2D6和3B1。免疫印迹表明McAb只以地细菌的RecA有反应,不与细菌其它成分发生反应。间接ELISA进一步表明,McAb2D6,3D1只对细菌RecA类蛋  相似文献   
10.
本文报道将SRBC免疫鸡的血清经33%硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200凝胶柱两次层析,收集第Ⅰ,Ⅱ蛋白峰作为免疫原免疫BALB/c小鼠。建立了2株(3A7、1C4)分泌抗鸡IgG和4株(6AS、5E2、6C7、6B1)抗鸡IgM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系;琼脂扩散试验表明6株细胞系分泌的单克隆抗体均为IgG1亚类。所制腹水的ELISA滴度达10~5~10~6。用免疫印迹技术(IB,Immunobllotting)对其中2株(3A7和6A5)的特异性作了进一步鉴定。  相似文献   
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