利用噬菌体随机肽库对神经胶质瘤母系SWO-38进行全细胞筛选

目的和方法:用噬菌体随机7肽库对神经胶质瘤母细胞(SWO-38)进行全细胞筛选,并通过竞争结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。结果:经过3轮吸附-洗脱-扩增!,噬菌体高度富集,并得到两个特异性较强的克隆。结论:利用噬菌体肽库可以简便、迅速的筛选出胶质瘤细胞特异性的克隆。     

小鼠白细胞介素12基因转染及其在黑色素瘤细胞B16F10中的表达

目的:探索小鼠白细胞介素12(mIL-12)基因在小鼠黑色素瘤B16F10细胞中的表达。方法:应用DNA重组技术将mIL-12基因插入pcDNA3.1真核表达载体中, 通过电穿孔转染B16F10细胞, 筛选出阳性细胞克隆后, 应用PCR、RT-PCR及Westernblot技术检测mIL-12基因在B16F10细胞中的整合及表达。结果:在DNA、mRNA及蛋白质3个水平均证实mIL-12基因已转染到B16F10细胞中并表达。结论:mIL-12基因可成功地转染体外培养的B16F10细胞并表达, 为进一步研究IL-12基因修饰的肿瘤细胞的基因瘤苗奠定了基础。     

利用RNA干涉技术研究雄激素受体在人前列腺癌细胞增殖中的作用

目的: 利用RNA干涉技术抑制雄激素受体(AR)的表达,研究AR在激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞增殖中的作用。方法: 设计、合成针对AR的4种不同的小干涉RNA(siRNA),连接到带有人H1启动子的腺病毒载体质粒pShuttle-H1-Ri中,构建成能产生AR-siRNA的质粒pShuttle-H1-Ri-AR,与能表达AR的质粒pcDNA-AR共转染HEK293细胞,Western blot 检测不同的siRNA对AR表达的抑制效率,选取抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒,感染LNCap、C4-2B和CWR22Rv1 3种对雄激素有不同反应性的人前列腺癌细胞,采用Western blot 检测感染后细胞中AR的表达程度,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性。结果: 4种siRNA都能抑制共转染AR的表达,用抑制效率高的siRNA制备重组腺病毒感染3种靶细胞后,均能特异性地抑制3种细胞中AR的表达,细胞的增殖活性也随之明显下降。结论: AR-siRNA通过抑制激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞中AR的表达,有效地抑制细胞的增殖,AR对维持激素依赖性和激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖活性具有十分重要的作用,是治疗前列腺癌的重要靶分子。     

子宫内膜腺癌细胞系特异性结合短肽筛选及分析

目的和方法：用噬菌体随机12肽库对人子宫内膜腺癌细胞系(EAC)进行全细胞筛选,并通过特异性结合实验检验所筛选出的克隆的结合特异性。 结果： 经过5轮“吸附-洗脱-扩增”，噬菌体高度富集,并得到1个结合特异性较强的克隆。 结论： 利用噬菌体肽库可以简便、迅速地筛选出与EAC特异性结合的克隆，为进一步研制子宫内膜癌的靶向药物提供实验依据。