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利用缺陷型单纯疱疹病毒载体在大鼠中枢神经系统表达外源基因 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究利用构建的Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)扩增子质粒载体pHSL,在辅助病毒HSV-1tsK(许可温度31℃)的辅助下,以首尾相连的连接体形式被包装成复制缺陷型的HSV-1假病毒颗粒,得到一种HSV-1混合毒种dvHSL。将dvHSL接种体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元和大脑皮质神经元后均可获得报告基因的表达;接种大鼠角膜后,lacZ基因在三叉神经节中持续表达两个月;直接注射接种到大鼠前脑皮质后,可在注射部位的局部表达报告基因近两个月。研究结果表明上述缺陷型单纯疱疹病毒载体可作为神经系统基因转移的工具,应用于神经系统生理、病理及神经系统疾病基因治疗的实验研究 相似文献
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利用基因工程技术构建成功质粒型Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体pHSV,其中含有HSV-1包装信号序列和HSV-1复制起点,以及HSV-1IE68启动子。为验证其构建是否成功,在其IE68启动子下游的多克隆位点上插入了E.coliLacZ基因,构建成pHSVL质粒。用HSV-1温度敏感株(tsK株)超感染传代细胞后,将这种质粒转染入该细胞,pHSVL可在辅助病毒HSV-1tsK(允许温度为31℃)存在的条件下被包装成病毒颗粒,由此得到的混合病毒含有HSV-1tsK和pHSVL假病毒颗粒,收获后再感染培养的Vero细胞,原位检测β-半乳糖苷酶活性呈阳性。同时用pHSVL病毒接种体外培养的SD大鼠胚胎脊髓运动神经元,用X-gal原位检测β-半乳糖苷酶的活性,亦发现有阳性的神经元存在。说明载体pHSVL携带的报告基因lacZ在这两种真核细胞中均得以正确表达。报告基因可为其它目的基因所代替,可用于神经生理、病理以及神经系统疾病基因治疗的实验研究。 相似文献
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通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用半乳糖末端糖蛋白受体(ASGP-R)介导的内吞作用,将外源基因导入真核细胞,与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体(Tf-R)介导的内吞作用相比,虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移,但ASGP-R法具有肝细胞特异性,而脂质体法和Tf-R法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒(HBV)mRNAPreC/C区的核酶质粒pCMV-Ripc特异性导入肝细胞并发挥作用,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),评价核酶在细胞水平对HBV抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒pCMV-Ripc与HBV抗原表达质粒pUC-2HBV共转染HepG2细胞时,核酶对HBsAg和HBeAg表达的抑制率分别为55.29%和68.73%。 相似文献
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以野生型2型人类腺伴随病毒(AAV-2)全基因组载体(pSSV9和pSSV9-int-)为基础,构建了重组AAV载体pSSV9/P40-LacZ(+)和pSSV9/P40-LacZ(-),制备AAV重组病毒,感染宿主细胞后表达了β-半乳糖苷酶基因。此外,用脂质体转染法将载体导入293细胞和A549细胞,进行了LacZ基因瞬时表达研究。结果显示,重组AAV载体(PSSV9/P40-LacZ(+))LacZ基因表达的动态变化特点是,转染后表达较早(12~24h)出现,并迅速达到高峰值(经24h),随后较快下降(经48~72h)并维持在较低水平。将启动子附近itr结构有差别的上述两载体转染宿主细胞72h后做表达水平比较,结果pSSV9/P40-LacZ(-)在293细胞和A549细胞中,LacZ表达水平均高于pSSV9/P40-LacZ(+)(1.2倍~1.4倍),提示启动子附近AAVitr结构的变异对表达有一定的影响。 相似文献
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利用基因工程技术分离出含有Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)包装信号序列和HSV-1基因组复制起点序列的片段,表达外源基因所必需的启动子序列以及其下游作为报告基因的lacZ基因片段,构建成质粒型HSV-1载体pHSVL。用脂质体介导的方法可将该质粒转染入经辅助病毒HSV-1tsK株超感染的Vero细胞,并将其包装成HSV-1假型病毒颗粒,可如天然病毒一样再感染传代细胞和神经细胞并在其中进行基因表达。在pHSVL的基础上,我们还构建了一种可同时表达两种外源基因的质粒型疱疹病毒载体pHLCL,即在pHSVL中插入第二个转录单位:HCMVIE启动子和其下游的荧光素酶基因(lucgene),由此获得的pHLCL病毒接种传代细胞证明它可在其中同时表达两种报告基因.本研究成功地构建了两种质粒型HSV-1载体,其独特的基因转移方式使之在神经生理、病理及神经系统疾病的基因治疗的实验研究中都具有广阔的应用前景。 相似文献
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构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重缄DNA技术将HSV-TK基因插入到含有及不含有α-FP启动子的EB病毒表达载体pEBAF5.1、pDR2中,并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。 相似文献
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通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV… 总被引:1,自引:1,他引:1
应用半乳糖末端糖蛋白受体介导的内吞作用,将外源基因导入真核细胞,与脂质体介导的传染和细胞表面转锪蛋白受介导的内吴作用相比,虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移,但ASGP-R法具有肝细胞特异性,而脂质体法和Tr-R法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒mRNAPreC/C区的核酶质粒pCMV-Ripc特异性导入肝细胞 并发挥作用,通过酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的乙型肝炎表现抗原 相似文献
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携带HSV-TK基因的人肝癌特异性EB病毒表达载体的构建及临床意义 总被引:1,自引:1,他引:0
构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组DNA技术将HSV-TK基因插入到含有及不含有α-FP启动子的EB病毒表达载体PEBAF5.1、pDR2中,并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果TK基因成功地克隆入PEBAF5.1及pDR2中。结论含有α-FP启动子的EB病毒表达载体是原发性肝癌基因治疗中新型、理想的候选载体之一。 相似文献