Ad-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24双基因共表达载体构建及表达

目的 构建poly(A)-Promoter介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白细胞介素-24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体Ad-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24(简称Ad-ING4-IL-24),研究Ad-ING4-IL-24对HepG-2人肝癌细胞生长的影响.方法 以含有poly(A)和Promoter (hEF1-eIF4g)基因片段的pORF-mbcl-2α质粒为模板,PCR扩增poly(A)-Promoter目的 片段(含Sal Ⅰ,Not Ⅰ),亚克隆至pAdTrack-CMV载体中以构建pAdTrack-CMV-poly(A)-Promoter空载体,再分别以pcDNA3.0-ING4和pcDNA3.0-IL-24重组质粒为模板,PCR扩增ING4(含BglⅡ,Sal Ⅰ)和IL-24(含XhoⅠ,XbaⅠ)目的 基因片段,并依次插入pAdTrack-CMV-poly(A)-Promoter载体中构建pAdTrackCMV-ING4-Poly(A)-Promoter-IL-24双基因共表达重组转移载体,测序正确后用Pme Ⅰ酶线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1构建同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24,再经Pac Ⅰ酶线性化后用脂质体转染QBI-293A包装细胞,经多轮扩增后收获Ad-ING4-IL-24重组腺病毒子,其效价可达3.5×109PFU/ml,用RT-PCR和Western blot法分别鉴定ING,4和IL-24基因在HepG-2人肝癌细胞中的转录和表达,MTT法和流式细胞仪检测Ad-ING4-IL-24对HepG-2人肝癌细胞生长抑制和诱导细胞凋亡的功能及其增效作用.结果 DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、poly(A)-Promoter和IL-24序列与GenBank报道的完全一致,RT-PCR和Western blot检测结果显示Ad-ING4-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在HepG-2人肝癌细胞中表达;并能明显抑制HepG-2人肝癌细胞的生长和诱导其凋亡,其中Ad-ING4-IL-24双基因组更优于相应各单基因组.结论 成功构建了poly(A)-Promoter介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制HepG-2人肝癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用.     

聚乙烯醇存在下结晶紫—杂多酸光度法测定地表水中微量磷酸盐和硅酸盐

磷酸盐和硅酸盐的测定一般都用分光光度法中的钼黄法和钼蓝法。钼黄法相当稳定,但灵敏度低;钼蓝法的灵敏度虽有所提高,但这些有色配合物的摩尔吸光系数都未超过1×10~4。近年来用结晶紫—杂多酸分光光度法同时测定磷、硅和砷,然而砷和硅的含量只能用减差法求出,误差较大。由于地表水中含磷、硅较多而含砷较     

用Lowry's法检测医用天然橡胶手套中水溶性蛋白质的含量

医用天然橡胶手套中的水溶性蛋白质被抽提到缓冲溶液中,然后将其浓缩,同时也将溶于水的杂质分离,这些杂质会影响测定结果,将抽提到的蛋白质再一次溶解,使用蛋白质标样,借助Lowry’s实验,通过比色法确定水溶性蛋白质的含量。     

Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达

目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响。方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体。按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增。将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用。结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用。     

852名儿童发铜及锌/铜比值与有关因素的分析

铜是人体必需微量元素之一。它参与造血过程,影响铁的吸收、运送和利用。迅速成长中的儿童缺铜,可引起贫血、骨质疏松、生长发育停滞;铜过多,同样导致机体生     

人发中痕量硅的分光光度测定法

测定人发中硅的含量对某些疾病的诊断有一定意义［1，2］。用铝蓝法［3.4］测定灵敏度较低。近来有人用硅钻酸——结晶紫法测定硅k’，但由于磷、砷的干扰，往往只能用减差法求得桂含量。我们用酒石酸作掩蔽剂，在磷和砷的存在下，成功地进行了人发中硅的测定。本法的灵敏度比钻蓝法提高十多倍．至材料与方法1．1试剂硅标准溶液问mg／ml）：精密称取硅酸钠2·52939溶于水，配制成250ml，使用前按适当比例稀释。1．25％聚乙烯酸的酸性溶液，1．25ml聚乙烯醇溶液50ml中含浓硫酸7ml（酸的浓度为2．smol／L）．2操作方法2显标准曲线的绘制：分…     

结晶紫-杂多酸分光光度法测定地表水中痕量磷酸盐和硅酸盐

磷酸盐和硅酸盐的测定一般都用分光光度法中的钼黄法和钼蓝法。钼黄法相当稳定,但灵敏度低;钼蓝法的灵敏度虽有所提高,但这些有色配合物的摩尔吸光系数都未超过1×104。近年来用结晶紫-杂多酸光度法同时测定磷、硅和砷,然而砷和硅的含量只能用减差法求出,误差较大。由于地表水中含磷硅较多而含砷较少,我们试验了在表面活性剂聚乙烯醇存在下,用控制酸度和加掩蔽剂等法排除磷砷硅间的相互干扰,分别测定了地表水中的磷酸盐和硅酸盐。方法灵敏度比钼蓝法提高十几倍,比钼黄法提高100多倍。精密度,准确度及回收率都得到满意的结果。1材料与方法1.1…     

全龟酶解液抗疲劳的初步研究

目的初步探索全龟水解液的耐疲劳作用。方法利用酶降解全龟酸抽提物,采用DABS-C1柱前衍生HPLC法,测定全龟酶水解液的游离氨基酸组份,以Folin-酚试剂法测定全龟抽提液的蛋白质与部分微量元素的含量,并观察了服用了全龟酶解液的小鼠耐疲劳效果。结果全龟酸抽提液含较高的蛋白质和钙,酶降解液含丰富的二十种氨基酸。结论全龟酶解液富含丰富的氨基酸,具有明显的抗疲劳作用。