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1.
2.
目的 探讨电离辐射对盐诱导激酶2(SIK2)蛋白和mRNA的诱导表达作用及细胞周期相关性。方法 HepG2细胞用60Co γ射线照射,蛋白质印迹法和实时定量PCR法分别检测细胞的SIK2蛋白和mRNA的表达,胸腺嘧啶双阻滞法同步化细胞,流式细胞术测定细胞周期的变化。结果 HepG2细胞2 Gy照射后4、6、10 h,SIK2蛋白表达显著增加 (t=3.00、3.98、4.17,P<0.05);10 Gy大剂量照射后,SIK2蛋白表达增加的趋势与2 Gy一致,但增加的幅度较前者低。2和10 Gy照射后SIK2基因 mRNA均在10 h出现了增加(t=4.54、2.74,P<0.05)。照后10 h出现了细胞G2/M阻滞高峰。利用同步化细胞分析表明,细胞周期不同时相中SIK2 mRNA的表达无明显差别。结论 2和10 Gy照射均能诱导SIK2蛋白表达增加,2 Gy的作用更加明显。细胞照射后10 h,SIK2 mRNA的表达水平增加,但与辐射诱发细胞G2/M期阻滞引起不同时相细胞的分布变化无关。 相似文献
3.
顾永清 《国际检验医学杂志》1983,(3)
现行的总脂肪酸测定法,是以乙醇代替水作为皂化介质。但产生脂肪酸乙酯,降低了从皂化液中提取脂肪酸的效能,特别是对中链脂肪酸更是如此。本改良法,是以苯:乙醇:水(12∶59∶29,V/V)热混合液提取粪中脂类,皂化30分钟也不产生脂肪酸乙酯,且增加脂类(因苯的存在)的溶解度,又因为增加了氢氧化钾浓度,使反应速度增加二倍。且由于提取仅用一种溶液,皂化不需转换容器,使操作简化,中链及长链脂类能定量回收。滴定操作简单准确、不须作标准曲线,是一种需时短、简易而准确的方法。试剂〈1〉纤维素胶溶液40 g/L。〈2〉95%乙醇。〈3〉6.8mol/L氢氧化钾。〈4〉1.02mol/L硫酸。〈5〉苯。〈6〉己烷。〈7〉50 mmol/L氢氧化钠溶液:溶2克NaOH 相似文献
4.
5.
目的 克隆并表达纯化人类PIF1蛋白,分析其生物化学活性.方法 从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到PIF1解链酶基因,插入融合有组氨酸的表达载体pET24b,构建pET24b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察PIF1蛋白表达;通过快速液相蛋白色谱纯化(FPLC)系统,采用亲和层析和凝胶过滤,纯化人类重组PIF1蛋白.薄层层析(TLC)法检测纯化PIF1蛋白的ATP酶活性.结果 克隆了人类PIF1基因,PIF1蛋白在大肠埃希菌(E.coli)中成功表达.结论 建立了PIF1蛋白纯化的方法,PIF1蛋白具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性. 相似文献
6.
启迪思维是课堂启发式教学的核心 ,其过程就是要求正确处理好教师为主导、学生为主体的关系 ,合理设计主导作用的切入点 ,充分调动学生主体的学习积极性、主动性。同时 ,围绕学习活动的核心 ,进行有效的思维 ,提高学习效率 ,从而实现预定教学目的。具体而言 ,课堂启迪思维如何设计 ?设计时要注意一些什么问题呢 ?以下谈几点我的认识。1 设问题情境教师在课堂教学要为学生创设问题的情境 ,然后在这种情境中引导学生探索前进。然而 ,这些情境的创设 ,不是课本就有的 ,而是要凭借教师的教学手段 ,结合教材内容 ,学生知识水平、实际教学条件以… 相似文献
7.
8.
目的 克隆并表达纯化人类PIF1蛋白,分析其生物化学活性.方法 从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到PIF1解链酶基因,插入融合有组氨酸的表达载体pET24b,构建pET24b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察PIF1蛋白表达;通过快速液相蛋白色谱纯化(FPLC)系统,采用亲和层析和凝胶过滤,纯化人类重组PIF1蛋白.薄层层析(TLC)法检测纯化PIF1蛋白的ATP酶活性.结果 克隆了人类PIF1基因,PIF1蛋白在大肠埃希菌(E.coli)中成功表达.结论 建立了PIF1蛋白纯化的方法,PIF1蛋白具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性. 相似文献
9.
目的:表达纯化人类PIF1解螺旋酶C-末端的338—641氨基酸的多肽PIF^338-641,同时用纯化蛋白制备特异抗体。方法:从HeLa细胞的eDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶C-末端1012—1926的cDNA片段(对应氨基酸338—641),插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b—PIF^338-641重组质粒,转化Rosetta^TM2(DE3)感受态细胞,使PIF^338-641蛋白在大肠杆菌中表达,用自制的镍亲和柱纯化PIF^338-641蛋白,并以纯化蛋白免疫家兔制备抗血清。结果:PIF^338-641蛋白在大肠杆菌中成功表达,纯化了PIF^338-641蛋白并制备了PIF^338-641蛋白抗血清。结论:制备的PIF^338-641蛋白抗体能与蛋白发生特异的免疫反应。 相似文献
10.
人类抗砷相关基因hARRG cDNA抗砷功能的研究 总被引:4,自引:3,他引:1
目的探讨人类抗砷相关基因hARRGcDNA对砷化物的抵抗作用。方法将人类抗砷相关基因hARRGcDNA基因开放阅读框克隆于真核表达载体pcDNA4/HisC中。通过磷酸钙共沉淀方法将带hARRGcDNA基因开放阅读框的表达质粒与空pcDNA4/HisC质粒分别转染到人正常肝L鄄02细胞中,细胞分别用2、4、6、8、10μmol/LNaAsO2染毒,根据染砷细胞存活数确定hARRGcDNA的抗砷性。结果生物信息学分析hARRG蛋白为膜外蛋白,转染含hARRGcDNA基因开放阅读框的pcDNA4/HisC质粒在砷环境中细胞存活数目多于未带hARRG基因开放阅读框的空质粒。结论hARRGcDNA基因具有一定的抗砷作用。 相似文献