单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化功能的影响

目的 探讨单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化损伤功能的影响.方法 分别将终浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mg/ml的单氰胺添加到大鼠肾细胞(NRK)培养液中.培养24 h后.检测NRK细胞培养物上清内乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 随着单氰胺浓度的增加,LDH活力和NO含量先升高后下降,MDA含量增加,NOS活力升高,SOD和GSH-Px活力下降,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01).结论 单氰胺可导致大鼠肾细胞抗氧化损伤功能下降.     

一步法三重荧光PCR检测手足口病病毒方法的建立及其运用

目的 建立一种三重荧光PCR检测手足口相关病毒的方法,并对收集的样本进行检测.方法 分别用普通PCR和单荧光PCR进行引物探针的测试,然后将确定的引物和探针混合进行三重荧光PCR测试和标本的检测.结果 建立了一种三重荧光PCR方法,利用该方法对94份标本进行检测,其中肠道病毒71型(EV71) 37.23％,科萨奇病毒A16(COX A16) 35.11％,其他肠道病毒4.26％.结论 本研究建立的三重荧光PCR可以特异地检测出引起手足口病的EV71和COX A16以及其他肠道病毒.     

SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析

目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VP1基因及其C端编码区,然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,以金属离子螯合层析法对表达的VP1、VP1C端融合蛋白进行纯化,经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价。结果:实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1及其C端的高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带,具有较高的纯度。Westernblot结果显示,纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应,而与阴性对照血清无交叉反应。结论:用纯化的VP1及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。     

布鲁氏菌病快速检测试纸条的探索

目的 建立一种操作简单、结果肉眼可视,并具有良好敏感性和特异性的适合现场快速检测布鲁氏菌病的胶体金层析方法。方法 将重组的布鲁氏菌外膜蛋白OMP22和OMP28作为胶体金标记物,抗OMP22单克隆抗体作为质控线,OMP22和OMP28蛋白作为检测线组装试纸条。结果 该试纸条检测牛布鲁氏菌标准阳性血清最大稀释度可达1:128;并且与牛结核、蓝舌病、牛病毒性腹泻、口蹄疫、牛白血病及小反刍兽疫血清无交叉反应;检测牛、羊源血清样品结果与商品化的ELISA检测试剂盒(IDEXX)符合率为95%,与虎红平板凝集试验(RBPT)检测的符合率为97.4%。结论 胶体金层析试纸条在检测布鲁氏菌病方面具有快速、敏感性高及特异性强的特点,适用于布鲁氏菌病动态流行病学调查和临床快速筛查。     

禽流感病毒H1、H3、H5、N2亚型多重RT-PCR检测方法的初步研究

目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽流感病毒H1、H3、H5、N2四亚型的一步法多重RT-PCR。利用禽流感H1、H3、H5、N2四亚型毒株和其它相关标准毒株进行敏感性和特异性试验。结果与结论所建立的一步法多重RT-PCR具有较高的特异性和敏感性,与禽流感其它亚型和NDV、IBV、ARV?IBDV的核酸均无交叉反应。用该方法检测现场样品395份(4省20多个地区),结果与经典检测方法一致。