短双链RNA对CVB3病毒细胞内清除作用的可行性研究及其机制探讨

目的 通过观察短双链RNA(Short interfering RNA,siRNA)体外转染HeLa细胞评价siRNA抗CVB3病毒感染的可行性和抑制作用机制.方法 通过细胞病变作用保护实验,选择合适的siRNA剂量.Western Blot、RT-PCR等方法在体外检测siRNA抗CVB3病毒复制作用及作用途径.结果siRNA-3753通过脂质体转染试剂能高效转入HeLa细胞,转染效率可达98.77%,在细胞内可稳定长达48 h.siRNA-3753的浓度为0.6 μmol/L对病毒抑制率高同时对细胞不会产生毒性作用,该浓度作为本次研究的实验剂量.siRNA-3753抗CVB3病毒感染作用是通过siRNA直接降解病毒基因得到的,而不是通过激活PKR或干扰素等其他未知因素起效的.结论 siRNA可以高效、较长时间的转染入HeLa细胞内,在低剂量时即产生较好的抗病毒感染作用,通过直接降解病毒基因组的途径特异性抑制CVB3病毒的复制及感染.     

干扰Itk表达抑制CVB3感染小鼠的炎症反应

目的 研究在病毒性心肌炎小鼠模型上敲减Itk蛋白的表达对小鼠炎症反应的影响.方法 BALB/c小鼠尾静脉注射表达Itk-shRNA的质粒后感染CVB3,第4天后观察Itk基因的抑制情况、小鼠存活率,PBMC增殖率及部分炎症性细胞因子的分泌水平.结果 Itk-shRNA转染至小鼠体内后脾细胞中Itk基因的mRNA水平与空白对照组及转染shRNAnon的对照组相比,敲减率约40％(P＜0.05).与转染shRNAnon组相比,Itk-shRNA组中Itk基因表达的抑制导致小鼠PBMC增殖活性降低约41％,小鼠的存活率提高(P＜0.05).Itk-shRNA组血清中细胞因子水平降低.结论 抑制Itk表达能有效降低小鼠PBMC的增殖,同时减少炎症相关细胞因子的分泌,提高小鼠的存活率.     

ITK蛋白调节小鼠脾淋巴细胞增殖分化的研究

目的 应用RNA干扰技术特异性抑制Itk基因的表达,观察Itk蛋白在淋巴细胞增殖和相应免疫因子合成分泌中的作用,进行Itk作为药物靶标的确认.方法 设计合成针对Itk基因的siRNA,将siRNA电转染至小鼠脾淋巴细胞,Western Blot检测Itk蛋白的表达、MTS方法检测细胞增殖率、ELISA方法检测细胞因子的含量.结果 实验组hk-siRNA在细胞水平上有效抑制了Itk蛋白的表达;Itk受抑制后细胞增殖率与对照组相比明显降低,差异有统计学意义,P<0.05;细胞因子IL-2,IL-4,IL-5,IFN-γ的分泌水平下降,P<0.05.结论 Itk表达受抑制后有效降低脾淋巴细胞的增殖率及细胞因子分泌的减少,研究验证了Itk在细胞增殖和炎性细胞因子分泌方面的重要免疫调节作用,为将其作为药物的靶基因提供实验依据.     

Itk蛋白在人PBMC增殖和细胞因子产生中的作用研究

利用RNA干扰的方法抑制人外周血单个核细胞(PBMC)中Itk基因的表达,探讨其抑制Itk后对人PBMC增殖和炎症性相关细胞因子产生的影响。设计针对Itk基因的siRNA序列,与外源表达Itk的pEGFP-C1-hItk质粒共转染至HeLa细胞,筛选出有效的干扰序列;利用电转染的方法将有抑制Itk作用的siRNA转染至人PBMC,检测Itk抑制状态,同时观察细胞增殖率及炎症性细胞因子产生水平的变化。实验表明,Itk-siRNA有效地抑制了Itk蛋白的表达;Itk受到抑制后细胞增殖率明显低于对照组(P0.05);几种重要炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-5、IL-10和IL-4产生水平下降。实验验证了Itk蛋白在人PBMC增殖和炎性细胞因子产生方面的重要作用。     

航天职工心理健康状况调查分析

目的调查分析航天在职职工的心理健康状况,并提出相应的干预建议及思考。方法采用抑郁和焦虑量表对航天在职员工的心理健康状况进行调查,并就结果进行统计分析。结果 26.7%的职工存在不同程度的心理问题,其中有抑郁倾向的占24.7%。结论航天在职职工的抑郁心理倾向较重,低学历和工人的抑郁倾向较多。     

航天职工心理健康状况调查分析

目的调查分析航天在职职工的心理健康状况,并提出相应的干预建议及思考。方法采用抑郁和焦虑量表对航天在职员工的心理健康状况进行调查,并就结果进行统计分析。结果 26.7%的职工存在不同程度的心理问题,其中有抑郁倾向的占24.7%。结论航天在职职工的抑郁心理倾向较重,低学历和工人的抑郁倾向较多。     

PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN TELOME RASE REVERSE TRANSCRIPTASE

INTRODUCTIONTelomerasemaycontributetocellreplicationbymaintainingthelengthofcellulartelomeres.Normaltelomeraseactivityisrequiredtomaintainprolifera-tionofgermlineandstemcells,lackingofwhichisimportanttothesenescenceandagingofmostsomat-iccells.Reactivationoftelomeraseisessentialforcelltransformation.Telomeraseactivityhasbeende-tectedinmosthumancancers,whileinhibitionoftelomeraseactivityincancercellsleadstocancersuppression(1,2).Consequentlytelomerasemaybeanewdiagnosticmarkeroftumorsandtarg…     

抑制Itk表达对Jurkat细胞分泌细胞因子的影响

目的 研究在Jurkat细胞上敲减Itk蛋白的表达对细胞增殖及炎症相关的细胞因子产生的影响,为Itk作为小分子药物靶标提供可行性实验依据.方法 针对Itk基因设计合成三个shRNAs,通过与pEGFP-C1-hItk质粒共转染,观察其抑制Itk-GFP融合蛋白的表达情况,筛选有效序列包装成慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染Jurkat细胞,观测Itk蛋白的表达水平、细胞增殖情况及细胞因子的变化.结果 Itk-shRNA1感染Jurkat细胞后Itk基因的mRNA水平与细胞对照组及感染shRNAnon的对照组相比,敲减率约55%,差异有统计学意义P＜0.05.Itk蛋白的敲减导致Jurkat细胞在受刺激时增殖降低,以未感染病毒的Jurkat细胞受刺激后酶标仪检测的A值为1,Itk-shRNA1感染组平均比值为0.54,shRNAnon对照组平均比值为0.83,两组差异有统计学意义,P＜0.05.Itk-shRNA1感染组中IL-2、IL-5、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平均较shRNAnon对照组低,差异有统计学意义,提示Itk蛋白的表达减少导致Jurkat细胞产生细胞因子减少.结论 抑制Itk表达能有效降低淋巴细胞的增殖,同时减少与炎症相关细胞因子分泌.     

河豚毒素与阿斯匹林联合应用对醋酸所致小鼠扭体反应和福尔马林致痛实验的影响

目的探讨河豚毒素与阿斯匹林联合应用是否具有协同镇痛效应。方法采用醋酸扭体实验和福尔马林致痛实验,小鼠分别肌肉注射河豚毒素、阿斯匹林及两者的混合物(0.39μg·kg-1,0.79μg·kg-1加不同浓度的阿斯匹林),观察联合用药是否具有协同镇痛作用。结果在两种镇痛实验中,河豚毒素和阿斯匹林单独应用,均具有一定的镇痛效应。在醋酸扭体实验中,两药的ID50s分别为2.1μg·kg-1和64mg·kg-1;在福尔马林致痛实验中,两药能明显缩短皮下注射甲醛后第2时相小鼠舔脚时间,ID50s分别为2.3μg·kg-1和74.2mg·kg-1。河豚毒素与阿斯匹林联合应用具有协同镇痛作用:(1)与单独应用阿斯匹林相比,河豚毒素0.39μg·kg-1(150LD50)、0.79μg·kg-1(125LD50)与阿斯匹林联合应用,分别使阿斯匹林的镇痛ID50从64.0mg·kg-1下降到12.6mg·kg-1和5.8mg·kg-1(醋酸扭体实验);从74.2mg·kg-1下降到13.0mg·kg-1和7.4mg·kg-1(福尔马林致痛实验)。(2)协同效应图分析显示两者具有明显协同作用。结论河豚毒素与阿斯匹林联合应用具有协同镇痛效应,本研究对于开发新型镇痛药具有一定的指导意义。     

短双链RNA对柯萨奇B组3型病毒体外感染的抑制作用研究

目的利用RNA干扰技术，在细胞、蛋白和基因水平上观察短双链RNA对柯萨奇病毒体外感染Hela细胞的增殖抑制作用、对病毒RNA复制和蛋白合成的影响。方法应用病毒致细胞病变作用保护实验、空斑形成减少实验、Western Blot、RT-PCR等方法，在体外检测其抗CVB3病毒作用。结果设计、合成的8条SiRNA中，针对基因组2B、VP4、2A、3C区的SiRNA-2、SiRNA-3、SiRNA-6、SiRNA-7具有不同程度的抑制病毒作用。其中，病毒基因组2B的SiRN．2作用效果最好，对Hela细胞CVB3感染72h后致细胞病变和空斑形成的抑制率为95％，抑制病毒蛋白的合成，病毒基因的复制水平也显著降低，在病毒0．1、0．01、0．001、0．0001 MOI感染水平上对CVB3致细胞病变作用的抑制率分别为30％、70％、88％和99％（48h）。结论针对CVB3基因组2B的SiRNA-2具有较强的抑制柯萨奇B3型病毒感染的作用。