人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化

目的：核凋亡诱导因子1（Nuclear apoptosis—inducing factorj，NAIF1）是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因，为了通过Polldown实验研究其结合蛋白，在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1（73-327）的截短体。方法：通过PCR方法扩增出NAIF1（73—327）cDNA，并插入pGEX—KG载体，实现插入基因的融合表达，对表达产物进行SDS—PAGE、Western blot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱（ESI—Q-TOF—MS／MS）检测分析。结果：DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX—KG—NAIF1（73-327），并在大肠杆菌中稳定表达，表达产物分子量约为53kD，与预期一致，表达量约占菌体总蛋白的22％，纯化蛋白经Western blot和二级质谱（MS／MS）分析证明表达蛋白为GST—NAIF1（73-327）融合蛋白。结论：获得了重纩GST—NAIF1（73-327）融合蛋白的高效表达，为下阶段NAIFl的结构与功能研究打下了基础。