N-乙酰转移酶影响食管癌细胞生物学功能的研究

目的 通过构建N-乙酰转移酶基因(NAA10)腺病毒表达载体,探讨其对食管癌细胞TE-1增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法 PCR技术扩增NAA10全长编码基因,通过重组腺病毒表达系统将其克隆入pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭载体,重组腺病毒表达载体并包装腺病毒颗粒Ad-NAA10.将携带人NAA10基因的腺病毒感染食管癌细胞TE-1,Western blot检测NAA10蛋白的表达,CCK-8检测其对TE-1细胞增殖的影响,碘化丙啶(PI)染色检测其对TE-1细胞周期的影响,Hoechst/PI双染检测其对TE-1细胞凋亡的影响.结果 酶切鉴定和测序证实NAA10腺病毒表达载体构建成功,腺病毒颗粒Ad-NAA10能在TE-1细胞中正常表达;NAA10可以抑制TE-1细胞的增值,影响细胞周期分布,促进细胞凋亡.结论 NAA10通过G1期阻滞和诱导凋亡从而抑制食管癌细胞的增殖,为进一步确定食管癌特异性生物标志物及探讨食管癌发病机制奠定基础.     

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞的影响

目的 观察系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血Th17细胞的变化以及雷公藤内酯醇对其的影响。方法 用流式细胞术检测15例SLE稳定期患者、16例SLE活动期患者和32例正常对照者外周血单个核细胞（PBMC）中Th17细胞比例,用RT-PCR检测PBMC中维A酸相关孤儿核受体γt（RORγt）mRNA表达水平。同时对SLE活动期和正常对照组PBMC用雷公藤内酯醇进行干预,培养24h后检测其对Th17细胞比例和RORγt mRNA表达的影响。结果 SLE稳定期及活动期组患者PBMC中Th17细胞比例均高于正常对照组,活动期组患者Th17细胞比例高于稳定期患者;SLE稳定期及活动期组患者PBMC中RORγt mRNA表达水平高于正常对照组,活动期组患者RORγt mRNA表达水平高于稳定期患者,差异均有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。经雷公藤内酯醇干预后活动期SLE患者PBMC中Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平低于没有干预组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SLE患者PBMC中Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平升高,雷公藤内酯醇在体外实验中能降低SLE患者PBMC中Th17细胞比例、减低RORγt mRNA表达水平。     

2例异基因造血干细胞移植后的植入状态监测及近期胸腺功能重建

目的 监测异基因造血干细胞移植后的植入状态,评价移植后的近期胸腺功能重建.方法 对1例接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)半相合亲缘供者与1例HLA全相合非亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的白血病患者,收集供者和受者术前、受者移植后1个多月、受者移植后4个多月的EDTA抗凝静脉血,同时采集10例正常健康志愿者的EDTA抗凝静脉血作为正常对照.采用STR-PCR技术检测20个常染色体STR基因座及1个性别基因座的基因型.采用实时荧光定量PCR方法检测受者不同时期和10例正常健康志愿者的T细胞受体DNA重排删除环(TREC)水平.结果 2例造血干细胞移植病例监测在移植后1个多月及4个多月均完全表现为供者源型.造血干细胞移植后1个多月及4个多月,半相合供者的白细胞及血小板恢复晚于HLA全相合供者.2例病人移植前TREC相对定量略低于年龄相近的正常对照组,移植后1个多月及4个多月TREC水平明显升高,其中HLA全相合移植病人TREC相对定量高于HLA半相合移植病人.结论 移植后1个多月及4个多月供者造血干细胞在受者体内完全植活.全相合造血干细胞移植后造血及免疫重建快于半相合造血干细胞移植.     

Akt3稳定表达细胞株的建立及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响

目的 构建人蛋白激酶Bγ(Akt3)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 从流产胎儿脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增Akt3 cDNA的全长序列后克隆入pEGFP-N2质粒中,构建成Akt3基因真核表达载体,然后转染入MDA-MB...     

双向凝胶电泳技术在食管癌差异蛋白表达检测中的应用

目的 寻找食管鳞癌早期诊断、疗效评估、预后监测的生物学标记物。方法 应用双向凝胶电泳分析10例患者食管鳞癌组织和相应癌旁组织的蛋白表达谱,并对差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果 共鉴定出29个差异表达蛋白,包括核不均一核糖核蛋白F等12个上调蛋白和人类蛋白酶体激活剂PA28β等17个下调蛋白。结论 食管鳞癌组织与相应癌旁组织的蛋白表达谱的表达具有显著差异性,表达差异的蛋白有可能成为食管鳞癌潜在的肿瘤标志物。     

MDA-7/IL-24对食管癌细胞的增殖和存活影响

目的：研究黑色瘤分化相关基因‐7（MDA‐7）／白细胞介素‐24（IL‐24）对食管癌细胞 Eca‐109与 TE‐1的增殖抑制作用和杀伤作用。方法应用RT‐PCR技术检测MDA‐7／IL‐24受体复合物在Eca‐109与 TE‐1细胞的表达,构建MDA‐7／IL‐24基因的重组腺病毒载体,将携带人MDA‐7／IL‐24基因的腺病毒Ad‐mda‐7分别感染食管癌细胞Eca‐109与TE‐1,通过Western‐blot检测MDA‐7基因的表达,通过CCK‐8检测该基因对食管癌细胞的增殖抑制作用,碘化丙啶（PI）染色后流式细胞仪检测MDA‐7对食管癌细胞周期的影响,Hoechst／PI双染色后流式细胞仪观察MDA‐7对食管癌细胞的诱导凋亡作用。结果 Eca‐109与 TE‐1均有表达MDA‐7／IL‐24受体复合物IL‐22R1／IL‐20R2;成功构建包装重组腺病毒,并经 Western‐blot验证其介导了外源基因 MDA‐7／IL‐24在Eca‐109与TE‐1细胞中的高效表达;CCK‐8实验结果表明,MDA‐7／IL‐24能显著抑制Eca‐109与 TE‐1细胞的增殖,且随着感染时间的延长及感染剂量的增加而增强抑制作用;细胞周期结果提示,MDA‐7／IL‐24使大量Eca‐109与TE‐1细胞被阻滞在G1～G0期;Hoechst／PI双染色结果提示,MDA‐7／IL‐24能明显促进Eca‐109与TE‐1细胞的凋亡。结论重组腺病毒能介导MDA‐7／IL‐24基因通过G1期阻滞和诱导凋亡,从而抑制食管癌细胞的增殖。     

荧光定量PCR检测T细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用

目的 检测接受亲缘与非亲缘的异基因造血干细胞移植(allogeneic hemopoietic stem cell transplant,alloHSCT)的恶性血液病患者免疫重建早期T细胞受体删除环(signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC)的水平,分析供受者间亲缘关系对免疫重建早期的影响.方法 采用TaqMan探针,Real-Time PCR技术,对6例(2例亲缘,4例非亲缘)allo-HSCT恶性血液病患者在移植前及移植后6个月的外周血sjTREC进行绝对定量检测.结果 每1 000个细胞中各组sjTREC水平分别为:亲缘组移植前(17.05±22.28)拷贝,移植后(24.26±25.50)拷贝;非亲缘组移植前(6.74±12.85)拷贝,移植后(28.30士19.12)拷贝.结论 两组患者移植后的sjTREC水平较移植前均有所上升,但无论移植前后两组之间的差异均不明显,提示在allo-HSCT患者移植后的免疫重建受诸多因素共同影响,供者是否具有亲缘关系在小样本检测中未发现明显差异.