丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性测定方法研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）NS3／4A丝氨酸蛋白酶在病毒多聚蛋白体加工和RNA复制的过程中发挥着重要作用,是治疗HCV的理想靶点。因为NS3／4A丝氨酸蛋白酶在HCV多聚蛋白上负责四个位点的切割,所以可根据此特性设计其活性的测定方法。此文就目前应用于NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性测定的方法进行综述,以期为筛选有效的抑制剂提供技术帮助。     

表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。     

DNA病毒和RNA病毒对宿主细胞糖酵解的调控机制研究进展

病毒需要利用宿主细胞为其复制提供原料。人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）、单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）、卡波济肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）、EB病毒（Epstein-barr virus, EBV）和腺病毒（Adenovirus, AdV）等DNA病毒和丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）、登革病毒（Dengue virus, DENV）、人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）和甲型流感病毒（Influenza A virus, IAV）等RNA病毒均可通过诱导宿主细胞糖酵解，为病毒复制和组装提供能量。DNA病毒HCMV可通过促进钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶表达、抑制葡萄糖转运蛋白1(Glucose transporter 1, GLUT 1)表达，诱导宿主细胞糖酵解，参与早期病毒复制；HSV可能通过激活糖酵解途径限速酶，诱导宿主细胞糖酵解，促进病毒核苷酸的合成；KSH...