HIPK3基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR-146的验证

目的构建HIPK3基因3'非编码区(3'UTR)双荧光素酶报告质粒,分析miR-146对HIPK3的调控作用。方法通过miRDB数据库和DIANA TOOLS数据库预测miR-146与HIPK3基因的结合位点。将HIPK3基因的3'UTR序列以及其突变体插入至荧光素酶报告质粒psi CHECK-2,构建野生型(HIPK3-WT)及突变型HIPK3-MU)重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为6组,1)HIPK3-WT+NC阴性对照;2)HIPK3-WT+miR-146a mimics;3)HIPK3-WT+miR-146b mimics;4)HIPK3-MU+NC阴性对照;5)HIPK3-MU+miR-146a mimics;6)HIPK3-MU+miR-146b mimics,48 h后检测6组细胞中荧光素酶活性。结果成功构建了HIPK3-WT及HIPK3-MU重组双荧光素酶报告质粒;HIPK3-WT和miR-146b mimics共转染293T细胞后,荧光素酶活性降低(P0.05)。结论 miR-146a与HIPK3基因不存在靶向关系,miR-146b可以调控HIPK3基因3'UTR。     

大鼠下丘脑腹内侧核与海马神经纤维联系研究

目的:探讨大鼠下丘脑腹内侧核与海马的传入、传出神经纤维联系,为摄食和能量代谢等内脏活动的神经调节机制的深入研究提供形态学依据。方法:参考大鼠脑立体定位图谱,借助脑立体定位仪将逆行示踪剂伊文思蓝(EB)分别注入SD大鼠左侧下丘脑腹内侧核(A组,18只)或海马CA2区(B组,18只),大鼠存活3 d后,4%多聚甲醛心脏灌注,冰冻切片,荧光显微镜下观察。结果:A组双侧海马的CA2,CA3处均显示有荧光标记细胞,且对侧荧光强于同侧;B组下丘脑腹内侧核处未见荧光标记细胞。结论:下丘脑腹内侧核与海马有广泛的纤维联系,可接受来自双侧海马CA2,CA3区的神经纤维投射,两者可能在内脏活动调节中发挥重要作用。     

MicroRNA-146在糖尿病心肌病中的调控作用

目的:探讨微小RNA-146 (miR-146)在糖尿病心肌病(DCM)发病机制中的作用,观察miR-146及其下游靶基因表达水平的变化。方法:60只雄性C57BL/6小鼠随机分为实验(DCM)组和对照(control)组,每组30只,实验组采用低剂量(50 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导建立糖尿病心肌病模型,对照组给予等量枸橼酸钠缓冲液腹腔注射,建模12周后取心脏做HE和Masson染色观察心脏病理改变,RT-qPCR检测miR-146 a和miR-146b及其下游靶基因白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)和TNF受体相关因子6(TRAF6)的mRNA表达,Western blot检测IRAK1和TRAF6的蛋白表达。结果:12周末HE染色显示,DCM组心肌肥大,结构紊乱;Masson染色显示,DCM组心肌内胶原纤维增多;RT-qPCR检测结果显示,DCM组中miR-146a及miR-146b较control组表达明显减少(P 0. 01),IRAK1的mRNA水平明显增高(P 0. 01),而TRAF6的mRNA水平下降(P 0. 01);Western blot检测结果显示DCM组的IRAK1蛋白表达增加,TRAF6的蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:miR-146可能通过调节IRAK1介导的炎症反应参与糖尿病心肌损伤的发生发展。     

大鼠海马认知障碍对血糖血脂的影响及其胃肠激素水平的变化

目的探索大鼠海马认知障碍对血糖血脂的影响及其胃肠激素水平的变化,为神经内分泌学研究提供实验依据。方法将Aβ1-42注入大鼠海马制备大鼠认知障碍模型,检测大鼠血糖血脂水平,测定大鼠胃残留率及肠推进比,酶联免疫法检测大鼠血清及胃组织中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)的含量。结果(1)实验组大鼠血清中空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)均明显高于假手术组和对照组(P0.05)。(2)实验组大鼠胃残留率明显高于假手术组和对照组(P0.05),实验组肠推进比明显低于假手术组和对照组(P0.05)。(3)实验组大鼠血清中MTL、GAS、SS的含量及胃窦组织中SS的含量均明显高于假手术组和对照组(P0.05),胃窦组织中MTL、GAS的含量较假手术组及对照组降低(P0.05)。结论大鼠海马认知障碍可能会引起大鼠血糖血脂水平升高,其机制可能与胃肠激素的变化进而导致胃肠运动障碍有关。