金黄色葡萄球菌D型肠毒素抗血清的制备和致敏血球效果的初步观察

我们制定了制备抗-SED血清的免疫方案,抗原用量6.9mg/兔,注射8针,免疫时间共14周。实验表明,抗-SED血清效价可达1∶128,所制备的抗血清与纯度高(98%)及纯度较低(50%～60%)的SED肠毒素都只产生1条沉淀线,并且融合,同SEA、SEB、SEC_I、SEC_Z均没有交叉反应。硫铵盐析沉淀法提取的抗-SED IgG,用于致敏醛化血球,该抗体诊断致敏血球检出SED灵敏度较高,约1ng/ml。同时用该抗体诊断血球对6种罐头食品人工污染SED肠毒素进行了检验,检出灵敏度为0.78～3.12ng/ml,略低于含纯SED标本,食物成分对反向间接血凝没影响,不出现假阳性和假阴性。效价高或效价低的抗-SED血清都可用于致敏醛化血球。     

PCR 检测产 A、B、E、F 和 G 型肉毒神经毒素梭菌的神经毒素基因

肉毒神经毒素分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ七个血清型，其中Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型引起人类肉毒中毒。为此，选取肉毒神经毒素的保守序列设计了一对简并引物，对１８株肉毒梭菌和８株相关梭菌进行了检测，表明该引物可特异扩增Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ和Ｇ型肉毒梭菌及产Ｅ型肉毒神经毒素的丁酸梭菌，产物为２６４ｂｐ，敏感性达１０ｐｇ细菌ＤＮＡ。采有酚－氯仿抽提法、固相载体捕获法和热裂解法处理产毒菌株，结果表明热裂解法安全、简便、快速，所制模板扩增效果明显。因此，此ＰＣＲ方法可用于快速敏感地检测引起人类肉毒中毒的梭菌。     

超抗原葡萄球菌肠毒素A对肝癌细胞免疫原性影响的研究

目的给肝癌细胞转入超抗原分子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的编码基因,使其表达这种毒素分子,以增强肝癌细胞的免疫原性,达到增强肝癌细胞诱导免疫排斥反应的目的.方法构建SEA编码基因的逆转录真核表达载体,转染病毒包装细胞系PA317后,行滴度测定.以高滴度克隆培养上清转导肝癌细胞株HHCC,筛选获得阳性表达株.然后利用外周血混合淋巴细胞进行杀伤实验.结果成功的构建了SEA的逆转录真核表达载体pLXSN-SEA,转导肝癌细胞后,获得表达SEA分子的阳性克隆HHCC-SEA.培养上清中SEA含量在pg的水平.外周血混合淋巴细胞杀伤实验结果显示,T淋巴细胞对转导后肝癌细胞的杀伤率可达45.6%.高于对HHCC 20.7%的杀伤率,T细胞对转导后肝癌细胞杀伤反应的Km值为5.18×104,而HHCC组的Km值为2.92 × 105,与前者的差别有统计学意义.结论肝癌细胞在转入SEA分子的编码基因后,表达出微量的SEA蛋白,却具有较强的免疫激活能力.即表达SEA的肝癌细胞在很低的浓度下,激活的T细胞即可对其达到最大杀伤反应速度,对T细胞的激活能力远远高于HHCC.     

生物素标记DNA探针在菌落原位杂交试验中的效果观察

本报告用生物素标记4．3kbDNA探针，以菌落原位杂交法检测15株产肠毒素金葡菌和4株阴性对照菌的情况、并与斑点杂交结果进行比较。结果显示菌落原位杂交法检出产毒金葡菌的阳性率是100%、与斑点杂交法阳性的符合率是92.9%。SEC，DNA探针与4株阴性对照菌杂交均呈阴性。     

葡萄球菌质粒的分子生物学研究简况

葡萄球菌是引起医院内感染和食物中毒的重要病原体,其耐药性、产毒性与质粒有重要关系。本文着重论述葡萄球菌质粒的主要生物表型及传递方式的研究进展。     

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究＊董邦权李恩善雷祚荣１杨琨金伯泉汪美先（第四军医大学免疫学教研室，西安７１００３２）由金黄色葡萄球菌产生的肠毒素（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ，简称ＳＥ）是一组分子量为２４～３０ｋｄ的单肽...     

一种新的层析等电点聚焦技术提纯葡萄球菌肠毒素D

我们成功地建立了一个新的层析等电点聚焦的三步程序.细菌培养液首先以CG-50吸附,洗脱出的粗毒素溶液在PBE_(94)柱上进行层析等电点聚焦.分别用5mMTris-Base pH9.4和Buffalyte_(8-4) pH5.4缓冲液洗脱,出现多个洗脱峰,即刻测定pH值.收集pH6.8～7.1的洗脱液,混合、浓缩,最后通过Sephacryl s-200过滤,以0.05M PBS pH6.8洗脱,出现3个峰,毒素在第1峰.毒素纯度为98%,回收率89%,p17.6,MW28500,SDS-PAGE上1条带.以~(125)I标记SED作探针的电泳转移和放射自显影均证明了提纯SED的免疫学特异性.免疫扩散试验,即使200μg/ml SED与不产毒素的FRI-184抗血清,也未有可见沉淀线.     

重组人CD80-SEA毒素逆转录病毒真核表达载体的构建

0　引言　肿瘤的免疫基因治疗已成为近年来研究的一个热点 .机体免疫系统抗肿瘤的主要方式是 T细胞介导的免疫排斥反应 ,而 T细胞被激活并杀伤肿瘤细胞依赖于两类信号 ,一类是抗原递呈信号 ,另一类是共刺激信号 .但尚未有人报道将上述两种信号结合在一起有效的应用到肿瘤的治疗当中 .我们通过基因工程手段构建同时表达共刺激分子 CD80和葡萄球菌肠毒素 A(Staphylococcal Enterotoxin A,SEA,一种重要的超抗原 )的逆转录病毒真核表达载体 ,使其表达这两个分子 ,发挥 SEA强特异性激发细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )活性和 CD80介导的第二信号…     

应用PCR方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证。采用ＰＣＲ和常规鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果可扩增含有保守ＨｉｎｄⅢ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株用两种方法都鉴定为单增李斯特菌，两种方法的结果完全符合。当用于食物标本检测时，ＰＣＲ反应遭强烈抑制。经过２５小时的增菌培养，对培养物进行化学抽提、纯化的菌体经加热裂解后直接用作ＰＣＲ反应模板，可使抑制作用大大降低。每毫升牛奶人工接种４个菌可用该法特异检出。结论建立了ＰＣＲ方法，可初步用于单增李斯特菌的快速、特异、敏感诊断。     

细菌毒素研究历史和分类

细菌毒素研究历史和分类雷祚荣综述严共华审校（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）一百多年来，毒素研究工作在全世界逐步展开，获得了巨大发展，特别是７０年代以来发展更快，被称为毒素研究的新世纪。研究工作的深度日益增加，生化、免疫、遗传等最...