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目的原核表达小鼠程序性死亡分子1配体胞外段(exPD-L1)蛋白基因并在体外初步验证其生物学活性。方法应用小鼠脾脏细胞总RNA,反转录PCR克隆exPD-L1基因序列,将其克隆到pGEX-4T-1载体中构建原核表达载体pGEX-4T-1-exPD-L1,经酶切和测序鉴定正确后,转化到E.coli BL21(D3)中,经IPTG诱导表达后,对包涵体蛋白进行复性和纯化。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot法检测证明其正确后,采用GST pull-down检测融合蛋白和PD-1的相互作用,鉴定其生物学活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1-exPD-L1,并在宿主菌中成功表达相对分子质量(Mr)55 000的重组蛋白,包涵体成功复性和纯化后经Western blot法证明其正确表达,同程序性死亡分子1(PD-1)蛋白的GST pull-down结果表明融合蛋白具有生物学活性。结论成功克隆和表达小鼠exPD-L1蛋白,并证明其具有生物学活性。 相似文献
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目的探讨艾塞那肽-4(exendin-4)能否促进脂肪干细胞向成骨细胞分化及分子机制。方法体外培养鉴定脂肪干细胞,通过脂肪干细胞的多向分化能力验证脂肪干细胞。给予脂肪干细胞exendin-4刺激,观察成骨相关基因蛋白的表达。结果 Exendin-4诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化抑制向脂肪细胞分化。不仅如此,exendin-4可能通过提高PI3K、 Akt和β-catenin的表达促进脂肪干细胞(ADSCs)向成骨细胞分化。结论 Exendin-4促进小鼠脂肪干细胞(ADSCs)向成骨细胞分化,可能是通过激活GLP-1R通路。 相似文献
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目的 探讨GLP-1受体激动剂Exendin-4腹腔给药对大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注所致大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用。方法 SD大鼠术前1 h腹腔注射Exendin-4,MCAO再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,TTC染色计算脑梗死体积,免疫荧光观察神经元和小胶质细胞生存数量及检测凋亡通路相关蛋白的相对表达水平。结果 Exendin-4能够保护由于MCAO再灌注后所致的脑缺血再灌注损伤,减少了脑梗死体积,降低皮层凋亡蛋白的相对表达水平,抑制神经元凋亡。结论 Exendin-4可以对MCAO再灌注所致脑缺血/再灌注损伤具有神经保护作用,该作用是通过抑制凋亡蛋白的产生,从而抑制细胞凋亡。 相似文献
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目的构建能在真核细胞中发生转座的PB-GF(piggyBac gene-finder)转座子系统,作为发现和研究编码基因的工具。方法通过克隆技术,构建PB转座子载体pPB[CMV-neo]和PB转座酶表达载体pCAG-PBase,转染HeLa细胞,G418筛选和亚甲基蓝染色,验证PB转座酶在真核细胞中的转座能力。构建PB转座子载体pPB[β-Gal-pA/act-EGFP],使其包含两侧翼端加入PB转座酶识别位点反向末端重复序列(ITR),ITR1和ITR2,以及启动子陷阱和PolyA陷阱的DNA片段;同时与PB转座酶表达载体pCAG-PBase一起,构成PB-GF转座子系统。将PB-GF转座子系统转染HeLa细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测PolyA陷阱报告基因EGFP的表达;通过X-gal染色,观察启动子陷阱报告基因β-Gal的表达,明确PB-GF转座酶系统在真核细胞中的转座情况。结果成功构建成以转座子PiggyBac为基础的,含有启动子和PolyA陷阱的PB-GF转座子系统,并用该系统转染HeLa细胞24 h后观察到有相当数量的EGFP和LacZ阳性的细胞出现,转座效率高达26%。结论成功构建PB-GF转座子系统并可以在真核细胞中发生转座。 相似文献
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目的探讨Exendin-4能否促进脂肪干细胞(ADSCs)向成骨细胞分化,促进骨形成,修复骨缺损。方法体外培养脂肪干细胞,将细胞分为成脂诱导组,成脂诱导+Exendin-4(0.1、1和10μmol//L);成骨诱导组,成骨诱导+Exendin-4(0.1、1和10μmol//L),通过油红O染色和茜素红染色分别鉴定脂肪干细胞的多向分化能力。将小鼠分为对照组、骨缺损组、骨缺损+ADSCs组和骨缺损+ADSCs+Exendin-4组。将脂肪干细胞与藻酸盐凝胶混合,注入损缺的骨组织内,连续给药1个月,观察骨修复效果。结果脂肪干细胞纯度达95.5%,Exendin-4以依赖于浓度和时间的方式促进ADSCs增殖(P0.05)。不仅如此,Exendin-4促进ADSCs向成骨细胞分化抑制向脂肪细胞分化。此外Exendin-4可以显著地提高骨体积/总体积(BV/TV)、骨小梁数量和厚度(P0.05),促进骨愈合。结论Exendin-4能够促进ADSCs向成骨细胞分化,抑制向脂肪细胞分化,改善骨缺损,促进骨形成。 相似文献
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