双位点保守基因特异性PCR-CE-RFLP快速鉴定病原菌的实验与临床研究

[目的]初步建立一个临床常见病原菌的标准PCR-CE-RFLP数据库,为临床快速鉴定病原菌奠定基础。[方法]选取临床分离的病原菌共167株,筛选16S rRNA基因和16S-23S rRNA间区基因的合适引物,分别用FAM和JOE两种荧光素标记,调整PCR反应条件,让两种引物能同时在同一条件下反应,所得产物先用普通琼脂糖凝胶电泳,再分别用限制性内切酶HaeIII进行不完全酶切,酶切产物50倍稀释后进行毛细管电泳(PCR-CE-RFLP),测定酶切片段长度差异。[结果]针对16S rRNA基因的RFLP谱数据只能将病原菌鉴定到"科"的程度,而单纯应用16S-23S rRNA间区基因的RFLP谱数据虽能区分绝大多数细菌,但个别种属内仍然出现相似的谱型。经过双位点PCR-CE-RFLP分析后,则可将所有细菌鉴定到"种"的程度。[结论]利用16S rRNA基因和16S-23S rRNA间区基因PCR-CE-RFLP进行细菌鉴定简便快捷,能将传统方法需要十几个小时甚至几十小时的鉴定工作缩短到几个小时,是一种极有临床应用价值的快速诊断方法。     

乙型肝炎患者联合检测前S1蛋白、HBV-DNA的临床意义

目的探讨乙型肝炎患者检测前S1蛋白(Pre-S1蛋白)、HBV-DNA在诊断乙型肝炎病毒复制中的意义.方法共检测256例乙型肝炎患者(HBsAg均阳性),乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)和血清Pre-S1蛋白采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法;HBV-DNA采用荧光定量PCR(PQ-PCR)法,并对结果进行分析.结果HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性者,Pre-S1蛋白和HBV-DNA检出率分别为89%和92.1%,两者间差异不显著(P＞0.05)该组患者Pre-S1蛋白,HBV-DNA检出率较高,HBeAg阴性患者,HBV-DNA与血清Pre-S1蛋白仍有不同检出率,均明显低于HBeAg阳性患者(P＜0.01)显示部分HBeAg阴性患者仍存在病毒复制.结论Pre-S1蛋白与HBV-DNA联合检测能敏感地反映乙型肝炎病毒复制情况.     

乙肝病毒前S_1蛋白检测在诊断乙型肝炎病毒复制中的意义

目的探讨前S1蛋白(Pre-S1蛋白)的检测在诊断乙型肝炎病毒复制中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测138例携带不同乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)和乙肝患者血清Pre-S1蛋白;采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测HBV-DNA,并对结果进行分析。结果HBsAg、HBeAg、抗HBcAg均阳性者,Pre-S1蛋白和HBV-DNA检出率分别为90.4%和95.2%,两者间差异不显著(P>0.05),该组患者Pre-S1蛋白、HBV-DNA与HBeAg的检出符合率较高。HBeAg阴性患者HBV-DNA与Pre-S1蛋白仍有不同检出率,均明显低于HBeAg阳性患者(P<0.01),显示部分HBeAg阴性患者仍存在病毒复制。结论Pre-S1蛋白能敏感地反映乙型肝炎病毒复制的情况,尤其可反映HBeAg阴性的乙肝患者病毒复制。     

育龄妇女不育不孕的实验室诊断及实验结果分析

目的探讨育龄妇女自身免疫抗体及生殖道衣原体(CT)、支原体(UU)感染与不育不孕患者的关系。方法选择2007年来我院门诊就诊和妇科住院的自然流产患者、不孕患者,没有反复流产史,且有一个健康婴儿的健康体检者,分别检测封闭抗体(APLA)、抗精子抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(EMAb)、抗心磷脂抗体(ACA)解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)。结果自然流产患者中APLA阴性占75%,不孕患者APLA阴性占17.73%,对照组APLA阴性占8.14%;流产组、不孕组的APLA、AsAb、EMAb、ACA、UU、CT阳性检出率明显高于对照组。结论育龄妇女体内存在APLA、AsAb、ACA、EMAb及生殖道支原体或衣原体感染与不育不孕患者密切相关,对有不良孕产史及不孕的患者进行自身免疫抗体及生殖道衣原体、支原体的检测,可为诊断及治疗提供科学的依据。     

呼吸重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因检测及耐药性分析

目的 了解呼吸重症监护病房内多重耐药鲍曼不动杆菌( MDR- AB)β-内酰胺酶基因和耐消毒剂磺胺复合物基因(qacE△ l-sull)的耐药性,为临床的合理用药提供依据.方法 对分离出的39株MDR-AB采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法检测耐药基因,并且进行耐药性分析.结果 39株MDR-AB中28株碳青霉烯酶-23 (OXA-23)阳性(71.8％),OXA-51阳性39株(100％),青霉素酶(TEM)阳性7株(17.9％),二十二碳六烯酸(DHA)阳性6株(15.4％),丝氨酸酶(PER)阳性5株(12.8％),头孢菌素酶(AmpC)阳性23株(59.0％),qacE△1-sull阳性39株(100％).OXA-23和AmpC同时阳性17株(43.6％).OXA-24,OXA-58,内膜蛋白酶-1(IMP-1),IMP-4,波形蛋白酶(VIM-2)和产巯基变量型(SHV)均未检出.在呼吸重症监护病房分离出来的菌株对哌拉西林、头孢他啶、环丙沙星、氨苄西林、头孢哌酮、头孢克洛、头孢唑啉的耐药率均＞90％,对多黏菌素B的敏感率为100％.结论 本院呼吸重症监护病房内MDR-AB主要携带的β-内酰胺酶基因为OXA-23和AmpC,根据其院内感染特征,为控制其传播,临床应加强有效的监测和隔离工作.     

乙肝病毒前S1蛋白检测在诊断乙型肝炎病毒复制中的意义

目的 探讨前S1蛋白（Pre-S1蛋白）的检测在诊断乙型肝炎病毒复制中的意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测138例携带不同乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）和乙肝患者血清Pre-S1蛋白;采用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测HBV-DNA,并对结果进行分析.结果 HBsAg、HBeAg、抗HBcAg均阳性者,Pre-S1蛋白和HBV-DNA检出率分别为90.4%和95.2%,两者间差异不显著（P＞0.05）,该组患者Pre-S1蛋白、HBV-DNA与HBeAg的检出符合率较高.HBeAg阴性患者HBV-DNA与Pre-S1蛋白仍有不同检出率,均明显低于HBeAg阳性患者（P＜0.01）,显示部分HBeAg阴性患者仍存在病毒复制.结论 Pre-S1蛋白能敏感地反映乙型肝炎病毒复制的情况,尤其可反映HBeAg阴性的乙肝患者病毒复制.