重组人白细胞介素7蛋白的表达、复性和纯化

目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7(recombinant human interleukin-7,rhIL-7)蛋白,为其功能研究打下基础。方法在已经对IL-7基因TA克隆的基础上进行亚克隆,插入pET-21b载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序成功后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,优化rhIL-7蛋白表达条件,并对表达的蛋白进行复性及纯化,利用免疫印迹鉴定重组蛋白。结果表达的蛋白与预期相对分子质量17 400相符,经优化后确定蛋白表达条件为:诱导温度为37℃、IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L、诱导时间为2 h,且rhIL-7的复性效率较好(约50%),纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经Western blot证实表达的蛋白为rhIL-7。结论成功获得高纯度的rhIL-7复性蛋白。     

缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究

目的构建、表达和纯化缺乏第4外显子的IL-7剪接变异体IL-7δ4(interleukin-7 splice variant lacking exon4,IL-7δ4),并对其生物活性进行初步研究。方法将TA克隆成功的IL-7δ4基因克隆至p ET-21b载体中,构建p ET-21b-IL-7δ4的原核表达载体,阳性克隆经测序正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IL-7δ4重组蛋白的表达、复性、纯化、Western blot法鉴定,分析其对外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2表达及凋亡的影响。结果成功构建重组原核表达质粒p ET-21b-IL-7δ4,表达蛋白的相对分子质量为12 400,与预期大小一致;复性效率较高(约65%),纯化后获得的蛋白纯度大于95%,Western blot证实其为rh IL-7δ4;与对照组比较,rh IL-7δ4能明显诱导外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,并抑制其凋亡(P<0.01)。结论成功表达高纯度且具有生物活性的rh IL-7δ4复性蛋白,它能明显上调外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,起抑制PBMCs凋亡作用。