ES探针荧光原位杂交法检测bcr/abl融合基因

目的探讨应用ES型bcr/abl探针(双色单融合)荧光原位杂交技术(FISH)在检测bcr/abl融合基因中的价值。方法慢性髓细胞性白血病(CML)初诊或复诊患者30例(骨髓标本43份),行普通染色体核型分析和ES型bcr/abl探针荧光原位杂交分析。结果 43份骨髓标本,6份未做骨髓培养,6份培养失败,在其余31份培养成功的标本中,找到Ph1染色体9份,另有1份标本多次检查都发现存在21p+染色体异常;43份骨髓都经FISH检测,13份标本发现bcr/abl融合基因。结论 ES型bcr/abl探针对CML初诊病例的bcr/abl融合基因有较高的检出率;对复发病例,不仅能辅助诊断CML,而且在监测白血病微小残留病灶、判断疾病的进展上均有较高的灵敏度。     

嗅鞘细胞的分离纯化及上清液中神经营养因子的测定

目的:创建理想的纯化嗅鞘细胞(OECs)的方法,并观察不同时间段OECs上清液中神经营养因子的含量,为选择OECs移植的最佳时机提供理论依据。方法:采用差速贴壁法结合免疫亲和吸附法纯化培养OECs,采用荧光染色法鉴定OECs并进行纯度测定;采用ELISA法检测培养上清液中神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质源性神经营养因子(GDNF)的水平。结果:通过上述方法,可以得到纯度85%以上的OECs,光镜下OECs突起细长,以典型的双极或三极细胞为主,背景有少量扁平的、折光性差的细胞存在;NGF、BDNF和GDNF在上清液中均有存在,其中NGF含量最高,NGF和BDNF含量随着培养时间延长逐渐升高,11 d达到高峰,GDNF仅在培养第11 d后检测到。结论:采用差速贴壁法结合免疫亲和吸附法可以获得较高纯度的OECs,培养11~14 d,OECs数量多且分泌旺盛,适合用于细胞移植。     

流式免疫磁珠法检测BCR-ABL融合蛋白在白血病中的意义

目的：探讨流式免疫磁珠（CBA）法检测白血病患者BCR-ABL融合蛋白的方法学评价及其意义。方法：采用CBA法检测64例白血病患者和10例正常人外周血白细胞中BCR-ABL融合蛋白表达,同时与实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）和荧光原位杂交（FISH）法比较。结果：正常人外周血白细胞BCR-ABL融合蛋白平均荧光强度（MFI）是10.58±3.88,64例白血病患者中BCR-ABL阳性25例,仅1例B-ALL患者检测结果与RQ-PCR结果不一致,与FISH检测结果完全一致。结论：CBA法检测BCR-ABL融合蛋白方法可靠,重复性好,简单,快速,具有良好的临床应用前景。     

FISH技术结合免疫表型分析在诊断多发性骨髓瘤中的作用

目的 探讨多发性骨髓瘤（MM）相关的分子遗传学异常和免疫表型的改变在辅助诊断MM中的作用.方法 运用商品化的MM相关遗传学异常的DNA探针RB1、P53、D13S319、1q21和IGH检测27例确诊MM中的分子水平的遗传学异常,采用多参数流式细胞术直接免疫荧光技术,CD45/SSC设门,采用CD19/CD56/CD38/CD138对上述病例进行免疫分型检测.结果 27例中有19例检出1种或以上的细胞遗传学异常,占70.4％,2种以上异常占59.3％.可疑骨髓瘤细胞检出率同为70.4％,异常细胞比例为2.4％～68.2％,CD19、CD56、CD38、CD138阳性率分别为25.9％、37.0％、74.1％、70.4％.结论 CD45/SSC配合CD38/CD 138设门可以较准确地分析异常骨髓瘤细胞群,结合分析荧光原位杂交检测的细胞遗传学改变结果和免疫分型结果,可以综合评价MM的疾病状态,从而更好地指导临床治疗.