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目的 目的 克隆、 表达细粒棘球绦虫组织蛋白酶B (EgCatB) 基因, 并对其进行生物信息学预测和分析。方法 方法 提取
细粒棘球绦虫总RNA反转录成cDNA, 以此为模板扩增目的基因。利用无缝克隆技术和麦胚无细胞表达体系克隆表达
EgCatB, 用免疫印迹实验进行验证。采用SignalP 4.1、 TMHMM sever v. 2.0、 TargetP 1.1对EgCatB编码蛋白分别进行信号
肽、 跨膜区及亚细胞定位的预测。采用BLASTP和GeneDoc进行EgCatB同源序列比对及保守位点分析。采用ProtParam、
SMART、 Predictprotein、 Swiss?model分析EgCatB编码蛋白的结构。采用NetOGlyc 4.0 Server和NetNGlyc 1.0 Server在线分
析EgCatB蛋白O型和N型糖基化位点。结果 结果 成功构建了重组质粒pEU?EgCatB。蛋白电泳和免疫印迹实验结果显示
该基因获得了可溶性表达。经生物信息学分析预测该蛋白分子量35.9 kDa、 理论等电点6.37, 为含信号肽的分泌蛋白, 酶
活性位点高度保守, 并通过Gln106
、 Cys
112
、 His
282
和Asn302
形成了催化中心。EgCatB基因所编码蛋白氨基酸序列中不存在N?
糖基化位点, 但存在9个O?糖基化位点。结论 结论 成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgCatB基因并对其进行了较全面的生物
信息学预测分析, 为该蛋白的功能研究提供了参考依据。 相似文献
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恶性疟原虫在人体内编码变异型表面抗原,可能引起其对人体进行免疫逃避。重复散布家族(rif)基因是编码变异型表面抗原的第一大家族,研究rif基因的调控如组蛋白修饰、阻遏元件调节、表达蛋白参与了免疫逃避等,具有很重要的意义。本文对调控rif基因机制的相关的研究进展进行综述,以期探究恶性疟原虫的致病过程。 相似文献
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