纳米粒子-siRNA复合物抑制脐血树突状细胞SOCS1基因表达的实验研究

目的:构建复合纳米粒子载体,传递siRNA序列,抑制脐血树突状细胞SOCS1基因表达.方法:构建PEI包覆的以SiO2和Fe3O4为主要成分的复合纳米粒子载体,以LipofectamineTM2000为对照,琼脂糖凝胶电泳检测纳米粒子-siRNA的结合效率;荧光显微镜和流式细胞术检测纳米粒子-SOCS1-siRNA序列被细胞摄入的效率;Western blot检测纳米粒子-siRNA复合物转染脐血树突状细胞后对SOCS1基因表达的抑制.MTT法检测纳米粒子-SOCS1-siRNA处理的脐血DCs对肿瘤细胞的杀伤活性.结果:纳米粒子可以高效结合siRNA序列,纳米粒子-SOCS1-siRNA序列可被脐血树突状细胞摄取,但是单独的纳米粒子抑制SOCS1基因表达效率比较低,在外加磁场的作用下,基因沉默作用显著增强,抗肿瘤作用也相应提高.结论:纳米粒子载体传递siRNA安全性好,效率高,可以高效沉默脐血树突状细胞SOCS1基因表达,能为设计更有效的以树突状细胞为基础的抗肿瘤疫苗提供新思路和实验依据.     

基于shotgun技术对鹿茸蛋白质组学的初步分析

目的 利用Shotgun 方法分析吉林双阳梅花鹿生长期鹿茸蛋白组分,完善鹿茸蛋白质表达谱的分析.方法 先将新鲜鹿茸高速匀浆取上清;硫酸铵沉淀获取鹿茸总蛋白粗提物,DEAE纯化获取蛋白组分I;行溶液内酶解、毛细管高效液相色谱方法/质谱 shotgun分析,所得数据按照IPI号对蛋白进行GO功能在线分析.结果 鹿茸蛋白组分I共有38个蛋白质,注释蛋白34个;其中,高丰度蛋白质8个;参与生物过程的蛋白质占鹿茸蛋白组分I总量的20.5% ;参与细胞成分的蛋白质占总量的38.2%;参与分子功能的占总量的44.1%.鉴定出的蛋白质细胞内外分布平衡,已知最多的蛋白质为具有结合功能的蛋白质.结论 Shotgun方法可有效分离和分析鹿茸蛋白质组分,为鹿茸蛋白组学的研究提供了基础理论数据.     

吉林省双阳梅花鹿鹿茸水溶性蛋白组分的提取及对小鼠主要脏器病理形态学的影响

目的:探讨吉林双阳梅花鹿鹿茸水溶性蛋白组分应用的安全性,为鹿茸蛋白的开发应用提供实验依据.方法:将新鲜双阳梅花鹿鹿茸进行高速组织匀浆,离心取上清,用饱和硫酸铵进行沉淀,PBS溶解沉淀,最后通过SephadexG25分子筛层析方法过滤除盐,初步获取鹿茸水溶性蛋白组分.将58只 ICR小鼠随机分为生理盐水灌胃组、鹿茸蛋白溶...     

吉林省双阳梅花鹿鹿茸蛋白组分的细胞毒性实验研究

目的探讨吉林双阳梅花鹿鹿茸蛋白组分对肿瘤细胞的细胞毒性作用。方法将新鲜鹿茸高速匀浆上清透析后,用超滤离心法获取分子量小于10kD,大于10kD小于30kD,大于30kD的3种蛋白组分;采用MTT法,检测3种蛋白组分对人肝癌SMMC-7721细胞系及人肺腺癌SPC-A-1细胞系的细胞毒性作用。另外,设鹿茸提取物原浓度的1/2,1/4,1/8为高,中,低3个浓度组,以0.01ml/g浓度皮下注射昆明小鼠,连续注射14天后,取小鼠脾细胞培养(培养基含ConA0.005mg/ml)72h后,加入MTT(5mg/ml)0.01ml,继续培养4h,测定OD值,计算淋巴细胞转化值。结果针对SMMC-7221细胞,分子量<10kD,>30kD,10kD<<30kD的鹿茸蛋白组分中,高剂量组的抑制率均大于30%,分子量<10kD,10kD<<30kD的鹿茸蛋白组分中,中高剂量组的抑制率大于30%,而且呈现剂量依赖性关系。针对SPC-A-1细胞,从所选取的高剂量至低剂量的抑制率均小于30%。鹿茸蛋白组分高、中、低剂量组的平均OD值分别为0.46±0.05、0.29±0.03和0.17±0.03;胸腺肽阳性对照组的平均OD值为0.47±0.07;生理盐水阴性对照组的平均OD值为0.12±0.04。鹿茸蛋白组分高、中、低剂量组的转化值分别为0.34、0.17和0.05;胸腺肽阳性对照组的转化值为0.35。鹿茸蛋白组分的高剂量组和胸腺肽对照组OD值比较,差异不具有显著性(P>0.05)。结论对于SPC-A-1细胞,鹿茸各蛋白组分无明显细胞毒性作用,而对于SMMC-7221细胞,各蛋白组分的高剂量、中高剂量组则呈现一定的细胞毒性作用。鹿茸蛋白组分高剂量组具有与胸腺肽注射液相近的促进淋巴细胞转化活性。     

三氧化二砷诱导乳腺癌细胞株MCF-7凋亡对端粒酶活性的影响

<正>乳腺癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,近年发病率逐年上升,且发病年龄也趋于年轻化。近年来研究发现As2O3不仅对APL细胞,而且对其他血液肿瘤细胞和许多实体瘤细胞均具有诱导凋亡作用。Wang等研究表明端粒酶与恶性肿瘤发生有着紧密的关联,p21特异性核苷