新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定

目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2（BMP2）目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白（GFP）的新型腺病毒真核细胞表达载体。方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别住点XhoI的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV—IRES—hrGFP-1。携带BMP2＊基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、PmeI酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2＋和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒。用PacI酶切去除其质粒成分,暴露腺病毒基因组的反向末端重复序列,转染293细胞,进行腺病毒的包装,完成新型腺病毒载体AdCMV—BMP2＋-IRES—GFP-1的构建。作为阳性对照,同时制备多年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体AdCMV—BMP2。以两种载体感染骨髓基质细胞,通过RT—PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱导成骨分化作用。结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计。感染骨髓基质细胞后,新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨分化活性的BMP2。结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体。     

血管生成素-1对移植颗粒脂肪组织存活率的影响

目的本试验通过建立大鼠的脂肪移植模型,在移植体内加入血管生成素-1,利用血管生成素-1促进血管生长,加速局部血液循环重建的作用,来研究其对移植体成活率的影响。方法健康6个月的Wistar大鼠36只,雌性,平均体重（300±5）g。采用随机对照设计的。将所有大鼠随机分成6组,每组6只,1～2组为2μg／mL浓度的Ang-1组,3-4组为0．25μg／mL浓度的Ang-1组,5—6组为生理盐水对照组。切取大鼠双侧腹股沟处的脂肪约1mL,纯化后按分组要求分别经2、0．25μg／mL Ang-1和生理盐水处理后,进行自体背部皮下移植。在术后30天取出移植的脂肪组织观察,测量脂肪体积,计算成活率。结果3组取出移植的脂肪组织后计算脂肪移植成活率,经高浓度Ang-1处理的移植体成活率明显高于盐水处理组的移植成活率（P〈0．01）,低浓度Ang-1处理组移植体成活率也高于盐水处理组的移植成活率（P〈0．01）,高、低浓度Ang-1处理组间差异无显著性意义。结论一定浓度的Ang-1对移植鼠颗粒脂肪组织有促进其血管增生的作用．从而提高了移植后脂肪组织存活率。     

GFP示踪FLAG抗原表位标记BMP2转基因腺病毒穿梭质粒的构建

目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP2）目的蛋白和示踪绿色荧光蛋白（GFP）报告分子的腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1。方法采用PCR技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因诱变,去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点XhoⅠ。测序检测诱变情况,将诱变后的BMP2基因定向导入pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1,将质粒分别转染人胚肾细胞HEK293A和兔骨髓间充质干细胞（MSCs）。通过限制性内切酶酶切图谱分析该质粒;采用荧光显微镜检查和免疫组化SP法测定HEK293A中的GFP和MSCs中的BMP2,行重组腺病毒穿梭质粒鉴定。结果质粒pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1经双酶切鉴定图谱分析构建正确,HEK293A、MSCs中均有GFP和BMP2表达。结论 pShuttle CMV-BMP2＋-IRES-hrGFP-1构建成功。     

富血小板纤维蛋白联合基质血管成分凝胶在面部年轻化中的临床应用

目的 探讨富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)联合基质血管成分凝胶(stromal vascular fraction-gel,SVF-gel)注射在面部年轻化中的临床效果.方法 自2019年1月至2021年1月,锦州医科大学附属第一医院烧伤整形美容科将90例求美者随机分为A、B、C三组...     

hBMP2转基因载体的构建及其在兔骨髓基质细胞中的表达

腹泻是离乳婴猴常见病,死亡率极高的病。作者多年的统计结果表明,死亡婴猴中58．3％死于腹泻。过去腹泻早期也使用过一些药物进行治疗, 但效果不太理想。最近,作者用胃肠粘膜保护剂联合思密达,口服补液盐辅助治疗婴猴腹泻,取得良好效果。 1 材料与方法 1．1 动物的选择选取离乳后3-60 d(4月龄离乳)的腹泻婴猴作试验观察,发病时间不超过24 h。全部婴猴半屏     

血管内皮生长因子165基因促进人脂肪间充质干细胞的增殖

背景：目前自体脂肪移植已广泛运用于美容整形和修复创伤导致的软组织缺损的修复,有研究表明,移植后1年移植脂肪存活率为20%-80%,因此,在移植后的早期及时、充分的血供建立,对于移植脂肪的存活是非常重要的。目的：观察血管内皮生长因子165转染人脂肪间充质干细胞的增殖情况。方法：体外传代培养人脂肪间充质干细胞,将重组血管内皮生长因子165基因入腺病毒液和空病毒液转染至脂肪间充质干细胞内,分别设为实验组和对照组,另设正常培养的细胞为空白组。结果与结论：RT-PCR,Western blot,MTT检测显示,与对照组和空白组相比,实验组血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白的表达及细胞增殖均增高(P < 0.05)。结果证实,腺病毒承载的血管内皮生长因子165基因转染脂肪间充质干细胞后不仅可以持续的表达目的蛋白,同时也能显著促进脂肪间充质干细胞的增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程