不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响

目的 比较不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响.方法 实验分3组:冻融的人卵巢组织单独培养组(A组);冻融的人卵巢组织与人早孕蜕膜单层细胞共培养组(B组);Matrigel培养基培养的冻融的人卵巢组织组(C组).冻融人卵巢组织在不同培养条件下培养14 d后,固定并检测各组卵巢组织中总体卵泡存活率(TFSR)及卵泡生长率(GFR).结果 与B、C组比较,A组TFSR和GFR均降低,差异有统计学意义(P<0.05).与C组比较,B组TFSR和GFR无明显变化,差异无统计学意义.结论 冻融卵巢组织中的原始卵泡在不同体外培养体系中有不同程度的生长;冻融卵巢组织与人早孕蜕膜细胞共培养或Matrigel培养基培养相对于单独培养更有利于卵泡存活和生长; 但这两种培养方法之间没有明显差异.     

成骨发育不全家系遗传学分析及植入前遗传学诊断研究

目的探讨植入前遗传学诊断在成骨发育不全出生缺陷预防中的应用价值。方法针对2015年5月在安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心就诊的1例成骨发育不全家系行外显子捕获测序筛查突变位点,并通过一代测序验证COL1A2基因突变。选择COL1A2基因上下游1 Mb区域42个单核苷酸多态性高频突变位点及基因编码区作为目标区域,构建患者夫妇的单体型。结合连锁分析及直接测序,完成植入前遗传学诊断。结果患者存在COL1A2基因c.982GT(p.Gly328Cys)的致病性突变,受累引产胎儿遗传了母亲的致病性突变。经植入前遗传学诊断,患者夫妇的9个囊胚中6个正常,3个受累。选择发育良好且遗传学正常的胚胎植入母体子宫后,足月分娩一健康婴儿。结论该研究是中国COL1A2基因突变植入前遗传学诊断的首例报道。结合选择性遗传标记连锁分析和突变位点直接测序进行植入前遗传学诊断,是单基因遗传病出生缺陷的有效预防手段。     

基于Array-CGH技术的胚胎植入前遗传学诊断在XYY综合征患者中的应用

目的 评估基于Array-CGH技术的植入前遗传学诊断(PGD) 对超雄综合征(XYY综合征)患者胚胎染色体进行分析的应用效果.方法 研究选取行PGD助孕的5例XYY患者及15例染色体易位患者,对两组的女方年龄、精子浓度、前向运动精子比例、获卵数、第二次减数分裂中期(MII)卵子数、优质胚胎数、染色体异常率进行比较.结果 XYY组和染色体易位组在女方年龄、精子浓度、PR、获卵数、MII卵子数、优质胚胎数均差异无统计学意义,PGD检测结果中,两组的染色体异常率差异无统计学意义.XYY组活检21枚胚胎,其中10枚胚胎为常染色体异常,1枚为性染色体异常.非整倍体率为52.38%,常染色体异常为47.62%,性染色异常为4.80%.结论 XYY综合征患者行体外受精时有和男性染色体易位患者类似的胚胎染色体异常率,Array-CGH可同时检测XYY综合征患者全部染色体情况,避免大量异常胚胎植入女方体内,有利于降低子代出生缺陷,值得临床应用.     

身体质量指数与复发性流产患者胚胎非整倍体的相关性

目的 探讨身体质量指数(BMI)对复发性流产(RSA)患者行胚胎植入前非整倍体遗传学检测(PGT-A)助孕结局的影响。方法 回顾性分析2019年1月至2020年12月安徽医科大学第一附属医院因复发性流产行PGT-A助孕的187例患者临床资料。根据患者BMI分为低体质量组(n=10)、正常体质量组(n=135)和超重组(n=42)。比较3组实验室指标[获卵数、二原核卵裂数、总促性腺激素(Gn)天数、非整倍体胚胎率及无可移植胚胎率]、胚胎移植结局[临床妊娠率、流产率及活产率]差异。结果 3组患者获卵数、二原核卵裂数、总Gn天数、非整倍体胚胎率及无可移植胚胎率比较,差异均无统计学意义(F=1.819、2.012、2.467,χ²=0.924、0.040,P均>0.05)。在首次移植一枚整倍体胚胎后,超重组患者临床妊娠率和活产率低于正常体质量组,差异有统计学意义(χ²=5.934、9.977,P<0.05);3组患者流产率比较,差异无统计学意义(χ²=4.755,P>0.05)。结论 BMI的增加并未导致RSA...     

卵母细胞发育停滞

大多数哺乳动物的卵原细胞在胎儿期进入减数分裂,如小鼠卵原细胞在妊娠第13．5天,人卵原细胞在胚胎第8周即开始减数分裂。经过减数分裂Ⅰ（MeiosisI,MI）前期的细线期、偶线期和粗线期后,双线期的卵母细胞被颗粒细胞前体细胞包裹,形成原始卵泡。性成熟后,原始卵泡启动生长发育,单层扁平颗粒细胞变成立方形,形成初级卵泡。初级卵泡发育过程中,颗粒细胞通过增殖由一层变成多层,     

单细胞双重巢式PCR扩增X、Y染色体STS、AMEL同源序列行性连锁遗传病诊断

目的 在单细胞水平建立一种简便、快速、高准确性的胎儿性连锁遗传疾病诊断方法,为无创性产前诊断性连锁遗传病和植入前遗传学诊断提供一定的理论与方法学依据.方法 提取男女单个淋巴细胞各150例,共300个细胞.随机分成3组,每组男女细胞各50个,双重巢式PCR技术在单细胞水平同时扩增X-类固醇硫酸脂酶基因(steroid sulfatase gene,STS)/Y-假基因和牙釉质基因(amelogenin gene,AMEL),对照组用单重巢式PCR技术在单细胞水平分别扩增两基因,比较单、双重巢式PCR技术在单细胞水平的扩增率及性别诊断正确率.结果 单重巢式PCR扩增男性细胞STS和AMEL,的扩增率和性别诊断正确率分别是84%、76%和84%、84%;而双重巢式PCR技术同时扩增上述基因的扩增率和性别诊断正确率分别为98%、96%.后者与前两者相比扩增率和性别诊断正确率均明显提高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 在单细胞水平性连锁遗传疾病诊断中,双重巢式:PCR技术较单重巢式PCR技术具有较高的扩增率及正确率,并有助于发现等位基因脱扣.该法在无创性单基因伴性遗传病的产前诊断和植入前遗传学诊断中具有较高的实际应用价值.     

NTRK1基因新发突变致遗传性感觉和自主神经病4型的遗传学分析及出生缺陷阻断研究

目的:探讨基于二代测序的植入前单体型分析在遗传性感觉和自主神经病4型（hereditary sensory and autonomic neuropathy Ⅳ,HSAN Ⅳ）出生缺陷阻断中的应用价值。方法:纳入1个HSAN Ⅳ家系,采用高通量测序和Sanger测序相结合的方法对 NTRK1基因进行突变分析...     

裸核注入法在小鼠体细胞核移植中的应用

目的：探讨供核细胞的处理方式对小鼠体细胞核移植胚胎体内外发育潜能的影响。方法：对供核细胞采用供体胞浆内完整注入和裸核注入两种不同的注核方式,观察重构胚的激活、卵裂及囊胚发育情况;并设立体外受精组通过胚胎受体内移植观察2种注核方式所获重构胚的发育结局。结果：完整细胞组的卵裂率和囊胚率均低于裸核组,差异有统计学意义（χ2卵裂=5.785,P=0.016;χ2囊胚=6.092,P=0.014）;3组所获仔鼠质量比较差异有统计学意义（F=14.331,P=0.00）,体外受精组最轻,完整细胞组最重,而完整细胞组所获得胎盘的质量高于裸核组及体外受精组,差异有统计学意义（与体外受精组相比,t=-8.786,P=0.00;与裸核组相比,t=-6.573,P=0.00）。结论：裸核注入法可提高小鼠体细胞核移植胚胎的体内外发育潜能。     

胚胎植入前遗传学检测在阻断常染色体隐性多囊肾病家系多囊肾/多囊肝病变1基因新突变遗传的应用

目的 探讨基于二代测序（NGS）技术的单核苷酸多态性（SNP）连锁分析在常染色体隐性遗传性多囊肾病（ARPKD）家系胚胎植入前遗传学检测（PGT）中的应用价值。方法 选取1个ARPKD家系,女方孕期产检发现胎儿有多囊肾行引产,胎儿基因检测为多囊肾/多囊肝病变1基因（PKHD1）复合杂合突变c.10444C> T（父源）和c.4303del（母源）,其中c.4303del突变为首次报道。采用多重聚合酶链反应（PCR）和NGS在突变位点两侧2M区域内选择335个信息丰富、紧密连锁的SNP位点作为遗传连锁标记,构建夫妇双方携带基因突变的SNP风险单体型。体外受精后行囊胚培养。对活检获得的滋养层细胞进行全基因组扩增（WGA）后,采用Sanger测序直接检测PKHD1基因突变,采用基于NGS的SNP连锁分析鉴别携带突变的染色体,同时进行拷贝数变异（CNV）分析以进行低深度的染色体非整倍性筛查。结果 6个活检囊胚中有4个为未携带突变的整倍体,有1个携带杂合突变的嵌合体,1个测序数据波动大,无法判断。选择其中1枚未检测到突变的优质整倍体胚胎进行冻融胚胎移植（FET）,足月分娩一健康婴儿。结论 ...