NF2基因在丙肝病毒非结构蛋白4B调节细胞周期中的作用

目的在HEPG2细胞内观察丙肝病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对神经纤维瘤病Ⅱ型(NF2)基因的影响及NF2在NS4B调节细胞周期中的作用。方法将细胞分为多组,其中3组对照,分别为无处理组、pCDNA3.1空质粒组和si-NF2 control组;3组作用组,分别为NS4B质粒组、NF2质粒组和si-NF2沉默基因组。每组经过转染、培养后收获细胞;RT-qPCR和Western blot检测细胞内相应基因转录及表达;流式细胞仪检测细胞周期。结果 NS4B可降低NF2转录水平(P0.01),同时NS4B的高表达和NF2的低表达对细胞周期具有相似的作用,及促进细胞周期向S期的转变;而NF2的高表达则使细胞周期停滞在G_0/G_1。结论 NS4B对NF2具有一定的调控作用,NF2可能参与NS4B调控细胞周期机制。     

临床分子生物学检验实习带教体会

目的临床实习是检验专业学生极其重要的一个学习环节,是学生把所学的理论知识应用到检验实践中的一个过程,在实习过程中学生的操作技能,以及合理运用理论知识分析问题、解决问题的能力得到培养,为顺利走向社会打下坚实的基础。因此,在有限的实习阶段,如何增强学生的检验综合素质是教学医院的重要课题。分子生物学检验是检验医学的重要分支,由于专业性强、技术要求高,稍有疏忽即可能造成严重后果。笔者结合自身分子生物学检验带教工作总结出了做好岗前培训,建立"无基因,无核酸"的意识;提高带教老师业务素质,落实岗位责任制;采用多种教学方法结合的方式等几点经验,旨在为带教老师提供一些启示。     

医学分子诊断技术临床带教方法探讨

临床实习是学生学习专业知识的重要途径,鉴于分子诊断技术在临床应用中的普遍性和重要性,本文总结医学分子诊断技术临床带教过程中需重点关注的内容和方法,为临床教学质量提供保障。     

结核分枝杆菌常见临床实验室检测方法的临床带教总结

结核病是严重危害人类健康的慢性传染病,本病起病隐匿,临床症状不典型,实验室和影像学检测是诊断该疾病的重要手段.实验室对该病的检测方法较多,在实际临床带教过程中,这些方法往往不是在一个专业组甚至不是一个时间段内学习,并且带教老师在临床带教过程中容易忽视同一项目、不同检测方法间的比较,因此学生在学习过程中并不能够很好掌握不...     

高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达

目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P0.01,P0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P0.01;r=-0.5501,P0.01;r=-0.7772,P0.01;r=-0.6785,P0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。     

高同型半胱氨酸血症对 ApoE －／－鼠心脏内质网应激的影响

目的：探讨高同型半胱氨酸血症（ HHcy）对ApoE－／－鼠心脏内质网应激（ ERS）的影响及其可能机制。方法取5周龄雄鼠12只作为正常对照组;另取5周龄雄性ApoE－／－小鼠36只,随机分为3组,ApoE－／－对照组：ApoE－／－小鼠饲以普通饲料配方饮食;高蛋氨酸组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食;干预组：ApoE－／－小鼠饲以高蛋氨酸饮食同时加0.006％叶酸和0.0004％维生素B12。喂养20周后处死,行主动脉病理切片HE染色观察主动脉是否有斑块形成;取心脏,采用实时荧光定量PCR法检测GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR检测GRP78和CHOP启动子区DNA甲基化水平。结果正常对照组及ApoE－／－对照组斑块不明显,高蛋氨酸组动脉粥样硬化斑块面积明显增大,主动脉内膜可见灶性病变部位隆起突入动脉腔内,干预组动脉粥样硬化斑块面积较高蛋氨酸组有所减轻。与ApoE－／－对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP、Caspase－12 mRNA水平明显升高（P＜0.05,P＜0.01）,干预组GRP78、CHOP mRNA水平较高蛋氨酸组降低（P＜0.05）。与ApoE－／－对照组比较,高蛋氨酸组GRP78、CHOP启动子区DNA甲基化水平降低（P＜0.01）,干预组GRP78、CHOP甲基化水平较高蛋氨酸组有所升高（ P＜0.05）。结论 HHcy可能通过影响DNA甲基化程度引起ERS相关基因表达改变,进而导致心肌细胞凋亡,补充叶酸与维生素B12可有效缓解HHcy所引起的ERS和凋亡。     

利用无缝克隆方法构建埃及伊蚊表皮蛋白基因AaCPR100A双向启动子苏云金芽孢杆菌穿梭载体

目的 构建表达dsRNA的双向启动子以及靶基因AaCPR100A的大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315-AaCPR100A。方法 以苏云金芽孢杆菌pSVP27A质粒为模板通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌Cry3A正向启动子Pro-1（+）；以埃及伊蚊RNA反转为cDNA为模板，扩增靶基因AaCPR100A；将大肠-苏云金穿梭载体pHT315质粒经HindⅢ和SalⅠ双酶切线性化；按照转录方向将正向启动子与靶基因通过无缝克隆插入穿梭载体pHT315中；以生物合成的含有Cry3A反向启动子序列的质粒为模版，经PCR克隆扩增Pro-1（-）反向启动子；将含有正向启动子与靶基因的中间载体通过Eco RⅠ限制性酶切酶线性化，按转录方向在靶基因下游通过无缝克隆插入反向启动子。结果 经琼脂糖凝胶电泳检测，正向启动子、靶基因AaCPR100A和反向启动子PCR产物条带清晰，质量良好，可用于无缝克隆实验；经无缝克隆连接双向启动子以及靶基因片段后，对含有重组载体pHT315-AaCPR100A的重组质粒进行PCR验证，在重组载体中成功扩增正向启动子、靶基因片段以及反向启动子，经核苷酸测序验证双向启动子...     

宁夏回族动脉粥样硬化患者外周血LCAT基因DNA甲基化与血脂水平的关系

目的探讨宁夏回族动脉粥样硬化(AS)患者外周血中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因启动子区甲基化水平及与血脂的关系。方法选择经颈部多普勒超声确诊的AS患者35例及正常者42例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血LCAT mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)检测外周血LCAT基因DNA启动子区甲基化程度,全自动生化分析仪检测血脂水平。结果 AS组血清TC、TG和LDL水平显著高于对照组(P0.001,P0.001,P0.05);HDL水平低于对照组;与对照组相比,AS组外周血LCAT mRNA表达降低了61.2%(P0.01),同时LCAT基因甲基化程度升高了1.3倍(P0.05)。结论回族AS患者外周血中LCAT DNA高甲基化与AS的发生发展和血脂变化相关。