应用催产素反义肽识别催产素受体复合物

本文观察了催产素反义肽对催产素的识别特性，该反义肽是按照牛ＯＴ和它的结合蛋白ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｎＩ［ＮＰＩ］氨基酸端１２个氨基酸编码ＤＮＡ的互补序列固相合成的。     

实时定量RT-PCR方法检测豚鼠TSHR免疫BALB/c小鼠甲状腺TSHR的表达

目的：建立外标准法SYBR GREENI实时定量（real—time）RT—PCR方法，以检测豚鼠TSHR分子免疫对BALB／c小鼠甲状腺TSHRmRNA的表达的影响。方珐：取正常BALB／c小鼠甲状腺提取甲状腺总RNA．逆转录后进行PCR，得到333bp扩增产物。经回收纯化后作为real—time PCR的标准品。稀释为10^6、10^5、10^4、10^3、10^2、10^1拷贝，制作标准曲线；并同时进行普通PCR，比较其灵敏度。优化反应条件使溶解曲线有特异扩增。检测豚鼠TSHR分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺TSHR mRNA的表达。结果：建立的外标准法SYBR GREENI实时定量RT—PCR方法可以灵敏的检测到10copy的核酸，灵敏度为普通PCR的10^4倍；溶解曲线只有特异峰，溶解温度为82．9℃。没有明显的引物二聚体和非特异峰出现。不同标准点批间变异系数范围为5．8％．14．3％（n=6）。与对照组比较，TSHR大分子免疫的BALB／c小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平显著升高（P〈0．05）。结论：外标准法SYBR GREENI实时定量lit—PCR具有灵敏度高，特异性强，重复性好的特点，比普通PCR更精确地检测出小鼠甲状腺组织TSHR mRNA的水平。     

供临床应用的人垂体生长激素初提物的制备

垂体性侏儒中除因缺乏激素受体者外,都须给予生长激素治疗,过去多用Raben酸性提取液或Li氏等硷性提取液。我们采用了Johns(1979)的Tris提取液,经过等电点沉淀法可得到HGH初提物。材料取自死     

TSH受体活性片段反义肽的免疫调节作用

目的通过观察TSH受体(TSHR)活性片段及其反义肽(RHST)对大鼠免疫活性的影响,探讨反义肽的免疫调节作用。方法TSHR片段TR1、TR2、TR3及相应的反义肽RT1、RT2、RT3,或3对互补肽被分别注入不同组大鼠体内,观察免疫前后各组大鼠血清中TT3、TT4、TSH受体抗体(TRAb)、甲状腺刺激型抗体、甲状腺刺激抑制型抗体和TSH抗体(TSHAb)等指标以及甲状腺组织的病理变化。结果3条TSHR片段均刺激TRAb的产生;RT1和RT2可同时诱导出TRAb和TSHAb;TR2引发的甲状腺上皮细胞增生和淋巴细胞浸润可因RT2的注入而缓解。结论实验证明,3条TSHR片段均具有免疫源性;RT1和RT2具有免疫调节作用,可能是TSHR片段的独特型;反义肽可减轻由天然肽引发的体液和细胞免疫,证明了反义肽通过免疫网络进行免疫调节的可能性。     

一例有排卵月经周期规律的高催乳素血症

垂体瘤、原发甲低、药物以及特发性下丘脑障碍均可引起高催乳素血症。明显的高催乳素血症经常伴有月经紊乱,不排卵、闭经和乳溢。许多研究者报告,有正常月经周期的妇女血清催乳素水平低于30ng/m1。本文报告一例尽管血清催乳素水平高于79ng/ml,但仍有正常月经的病例。 不孕妇女,34岁,1982年1月因原发不孕10年     

TSHR大分子及其活性多肽在BALB/c小鼠体内的免疫原特性研究

目的：观察促甲状腺激素受体(TSHR)及其活性片段aa352-366在BALB/c小鼠体内的免疫原特性研究，探讨TSHR分子结构与功能的关系。 方法: 将血蓝蛋白(KLH)偶联的多肽TSHRaa352-366-KLH和多肽加受体混合组-TSHRaa352-366-KLH 加豚鼠TSHR(gTSHR),间隔15 d分两组分别注入BALB/c小鼠腹腔内，对照组注射KLH， 测定各时相血清中甲状腺激素及促甲状腺激素受体抗体水平；90 d后处死动物，检测小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平及其病理变化。 结果: 与各组自身0 d的数据比较，多肽组小鼠血清TT3、TT4水平降低(P<0.01)，TRAb升高(P<0.01)； 多肽加受体混合组TT3、TT4水平降低(P<0.01)，TRAb(P<0.01)、TBAb(P<0.05)和TSAb(P<0.05)均升高。 此外，混合组甲状腺组织TSHR mRNA水平明显高于正常组(P<0.05)；多肽组小鼠甲状腺组织显示滤泡上皮细胞扁平、核缺失、皱缩及胶质浓缩等甲减的病理改变, 而混合组则呈现不均一的病理变化。 结论: TSHR以及活性片段hTSHRaa 352-366都具有免疫原性， 刺激小鼠血清TRAb、TSAb和TBAb的产生，引起甲状腺组织的病理改变。     

分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的应用

目的:观察促甲状腺激素受体(TSHR)分子上的特定片段-TR1(aa37-45)、TR2(aa353-366)和TR3(aa648-655)与其相应的反义肽- RT1(aa45-37)、 RT2(aa366-353) 和RT3(aa655-648)之间的选择性识别。方法:制备固相反义肽亲和层析柱-RT1-sepharose 4B, RT2-sepharose 4B和RT3-sepharose 4B,采用阶段洗脱法,观察相应天然肽- TR1、TR2 和TR3 在柱上的滞留行为。结果: TR1、TR2和 TR3与其相应的反义肽之间存在选择性识别,而反义肽RT1且能识别TSHR大分子; 此外, 牛促甲状腺激素(bTSH)蛋白还能被TR1识别。 结论:本实验证实了分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的存在,它可能用于生物大分子蛋白质的分离、促甲状腺激素(TSH)与受体(TSHR)结合位点的测定,并用于实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验性治疗。     

pcDNA3.1/hTSHR_(1043～1354 bp)重组体的构建及在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的构建重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp及在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达hTSHR膜外区氨基酸314～418蛋白分子。方法提取人正常甲状腺组织总RNA,反转录后进行聚合酶链反应(PCR),将纯化的扩增产物hTSHR1043～1354bp与表达载体pcDNA3.1连接后转化TOP10E.coli感受态菌。经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定插入序列和方向正确的重组质粒转染CHO细胞,并用Westernblot方法鉴定表达的蛋白。结果PCR扩增得到hTSHR膜外区C端312bp的基因片段hTSHR1043～1354bp。该片段与表达载体pcDNA3.1的连接后转化TOP10E.coli感受态菌。重组质粒经PCR、HindⅢ酶切和核苷酸序列测定方法鉴定证实hTSHR1043～1354bp片段插入序列和方向正确。重组质粒转染的CHO细胞裂解液经Westernblot可以检测出15900的蛋白条带,与预期的蛋白相对分子质量相符。结论成功构建了重组体pcDNA3.1/hTSHR1043～1354bp,其转染CHO细胞后表达159000的目的蛋白(hTSHR氨基酸314～418蛋白片段)。     

酶联免疫吸附试验在甲状腺球蛋白诊断中的初步应用

酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)为70年代的一项免疫学科技术,具有较高的特异性、敏感性,目前被广泛应用于微生物学、血液学、寄生虫学及内分泌学等方面,但在内分泌学领域的应用还不够成熟。Van Weeman和Shuurs曾报导酶标法已用于HCG的测定,以后他们又用同法测定雌性激素,但敏感性较差。最近Yorde等用一种同类型的竞争性酶免疫测定法测定HCG其结果与放射免疫法相同。此外也曾用于胰岛素、亲甲状腺素及甲状腺球蛋白等的测定。     

人类甲状腺球蛋白的免疫反应

在人类甲状腺疾病中,自家免疫机制是一个重要的发病因素,如近年来在甲状腺机能亢进的病人血清中发现了长效甲状腺刺激素(LATS)及其保护因子(LATSP)。第四军医大学一附院用荧光免疫方法测出某些甲状腺疾病中的甲状腺微粒体抗体及甲状腺球蛋白抗体。我组于1979年开始用体液免疫测定法对一些甲状腺疾病患者血清做了甲状腺球蛋白抗体的检查,报告如下: