中药注射液体外肾细胞毒性评价的方法学探讨

目的研究柴胡注射液和丹参注射液在犬肾近端小管上皮细胞（MDCK细胞）和人胚肾细胞（HEK-293细胞）模型的毒性作用,并探讨中药注射液体外肾细胞毒性检测的实验方法。方法选用马兜铃酸A作为阳性对照,将不同厂家和批次的丹参注射液、柴胡注射液的原液及稀释液,与MDCK细胞或HEK-293细胞共同孵育,通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）量化细胞毒性,计算相对增殖率,进行中药注射液体外肾细胞毒性评价。结果在MDCK细胞模型中,两批丹参注射4个液稀释浓度下毒性分级显示为0级,一批稀释9、27、81倍后显示为0级,柴胡注射液稀释27、81倍后显示为0级;在HEK-293细胞模型中,一批丹参注射液4个稀释浓度下毒性分级显示为1级,一批稀释9、27、81倍后显示为1级,一批稀释27、81倍后显示为1级;柴胡注射液稀释27、81倍后显示为2级。结论利用肾脏细胞来源的细胞,可尝试建立中药注射液体外肾细胞毒性检测的实验方法。     

CCl4致小鼠急性肝损伤模型的研究

目的建立稳定的CCl4小鼠急性肝损伤动物模型。方法观察小鼠性别、给药剂量、测定方法、动物质量因素对CCl4所致急性肝损伤模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平的影响。结果动物性别对肝损伤模型动物ALT检测指标有一定的影响,0.1%浓度CCl4作为造模浓度较适宜,肝损伤模型动物ALT、AST指标机测较手测准确、简便,动物质量因素对CCl4肝损伤动物模型影响较大。结论 CCl4致小鼠急性肝损伤模型效果受动物性别、给药剂量和动物质量因素影响较大,各实验室应进行标准化研究,以保证CCl4急性肝损伤动物模型的稳定性。     

茅莓根中对多巴胺神经元保护作用成分的分离鉴定研究

目的：从茅莓根中分离鉴定出具有保护多巴胺能神经元作用的甜叶苷R1（Suavissimoside R1）。方法：用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）处理的小鼠帕金森病模型检测从茅莓根中提取出的粗提物以及二次提取物（精提物）的保护作用,然后在此基础上对精提物进行分离纯化,最后分离出白色针状结晶性成分,根据化合物的理化常数测定和用红外光谱数据分析鉴定该成分结构为甜叶苷R1。以1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP＋）处理的大鼠中脑多巴胺能神经元为模型,检测了甜叶苷R1对多巴胺能神经元的保护作用。结果：分离得到甜叶苷R1。甜叶苷R1浓度在100μmol/L时,对MPP＋处理的多巴胺能神经元有明显的保护作用。结论：甜叶苷R1对多巴胺能神经元有保护作用。     

基于BALB/c小鼠的局部淋巴结试验用于皮肤致敏性评价的实验研究

目的：用BALB/c小鼠建立基于掺入溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）和酶联免疫吸附测定（ELISA）的小鼠局部淋巴结试验（LLNA）改良方法（LLNA：BrdU-ELISA）,并对该方法进行评价。方法：试验设溶剂对照组（丙酮/橄榄油、丙酮、二甲基亚砜或蒸馏水）,阳性对照组（25%己基肉桂醛）和受试物组（选择22种化学物和5种化妆品,配成1~3个不同浓度）,每组4只小鼠。每天上午9：00在小鼠双耳背部分别涂抹受试物25 μL,连续染毒3 d,第4天不作处理,第5天腹腔注射BrdU标记液0.5 mL。第6天称量耳廓质量,分离颌下淋巴结称取质量并制成单细胞悬液,用ELISA试剂盒测定淋巴细胞增殖。结果：50%己基肉桂醛、5%二氯化钴、10%乳酸、25%乳酸、50%乳酸和2号染发剂引起耳廓质量显著增加（P < 0.05或P < 0.01）,为刺激阳性,其他化学物和化妆品为刺激阴性;15种化学物（2,4-二硝基氯苯、丁子香酚、异丁子香酚、3-氨基苯酚、反式肉桂醛、己基肉桂醛、香叶醇、对苯二酚、水杨酸己酯、甲醛、戊二醛、六水硫酸镍、二氯化钴、重铬酸钾、乳酸）和2号染发剂为致敏阳性（SI>1.6）,其他化学物或化妆品为致敏阴性。该方法阳性预测率为93.3%,阴性预测率为100%,假阳性率为14.3%,假阴性率为0,灵敏度为100%,特异性为85.7%、准确度为95.2%。结论：LLNA：BrdU-ELISA方法用BALB/c小鼠可较好地评价化学物/化妆品的刺激性和致敏性,可在化妆品安全性评价中发挥重要作用。     

清开灵注射液对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护机制研究

目的：观察清开灵注射液对小鼠急性肝损伤的保护作用,并阐明其可能机制.方法：建立小鼠CCl4急性肝损伤模型,观察清开灵注射液对CCl4诱导升高的小鼠血清ALT、AST活性影响,及对肝脏病理损伤的保护作用;测定肝组织中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性.结果：与阴性对照组比较,模型组小鼠ALT和AST均显著升高（P＜0.01）,MDA明显增加（P＜0.01）,SOD显著降低（P＜0.01）,组织病理损伤明显.与模型组比较,清开灵注射液中剂量组（10 ml·kg^-1）和高剂量组（20 ml·kg^-1）均能显著降低肝损伤小鼠的ALT和AST（P ＜0.05 或0.01）,并明显减轻了肝脏组织的病理损伤.清开灵注射液低剂量组（5 ml· kg^-1）、中剂量组和高剂量组的MDA均较模型组显著降低（P＜O.05或0.01）,SOD水平则显著升高（P＜0.05或0.01）.结论：清开灵注射液对小鼠CCl4致急性肝损伤的保护作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

CCl4致小鼠急性肝损伤模型的研究

目的 建立稳定的CCl4小鼠急性肝损伤动物模型.方法 观察小鼠性别、给药剂量、测定方法、动物质量因素对CCl4所致急性肝损伤模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的影响.结果 动物性别对肝损伤模型动物ALT检测指标有一定的影响,0.1%浓度CCl4作为造模浓度较适宜,肝损伤模型动物ALT、AST指标机测较手测准确、简便,动物质量因素对CCl4肝损伤动物模型影响较大.结论 CCl4致小鼠急性肝损伤模型效果受动物性别、给药剂量和动物质量因素影响较大,各实验室应进行标准化研究,以保证CCl4急性肝损伤动物模型的稳定性.     

紫草素和姜黄素在化妆品动物替代试验的研究

目的 探究化妆品中药原料紫草素和姜黄素在动物替代试验中的应用.方法 选用紫草素和姜黄素单体原料分别进行体外兔角膜上皮细胞短时暴露试验,体外3T3中性红摄取光毒性试验与皮肤变态反应:局部淋巴结试验(DA法,LLNA:DA).结果 紫草素在3个试验中结果均为阴性.姜黄素不能在兔角膜上皮细胞短时暴露试验和体外3T3中性红摄取...     

中药复方卫生洗剂与栓剂体内外抑菌作用比较研究

目的：研究中成药类卫生洗剂的体内外抑菌作用,并与传统栓剂剂型进行对比,探讨不同剂型女性卫生用品的抑菌药效学比较的体内外实验方法适用性.方法：体外抑菌试验：选用液体试管法检测样品对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌的体外抑菌作用.体内抗菌试验：取SD大鼠建立念珠菌性阴道炎模型,卫生栓和卫生洗剂分别每天给药1次,连续8d,观察大鼠阴道局部炎症反应并进行阴道病理检查.结果：体外抑菌试验：卫生栓剂和.洗剂均能明显抑制细菌的生长,两种剂型的最低抑菌浓度（MIC）均为0.003 1 g· ml^-1.体内抗菌试验：大鼠阴道肉眼观察结果显示卫生栓及卫生洗剂组炎症明显轻于模型组.阴道分泌物培养后涂片检查结果显示,与模型组比较,卫生栓及卫生洗剂组均出现不同程度白色念珠菌转阴,高剂量组抗菌效果优于低剂量组.病理检查大鼠阴道黏膜刺激试验评分结果显示,与正常组比较,模型组的评分显著增高（P＜0.01）.卫生栓的高、中和低剂量组与模型组比价,评分显著降低（P＜0.01或0.05）,卫生洗剂的高、中和低剂量组与模型组比价,评分显著降低（P＜0.01）.卫生洗剂的各剂量组与对应的旧剂型卫生栓的各剂量组间比较差异无统计学意义.结论：卫生洗剂与卫生栓的体外和体内抑菌作用没有差异.测定最低抑菌浓度的液体试管法和大鼠念珠菌性阴道炎模型稳定可靠,可考虑作为不同剂型女性卫生用品的药效对比的体外和体内首选实验方法.     

清开灵注射液护肝药效限值测定法的建立

目的 研究清开灵注射液在小鼠四氯化碳(CCl4)急性肝损伤模型的保护作用,探讨其护肝药效测定的限值法.方法 小鼠腹腔注射清开灵注射液进行预处理后口服灌胃给予0.5％CC14,检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,确认肝保护作用的限值剂量.以20 mL/kg作为限值剂量对2个厂家共4个批次的清开灵注射液的药效进行比较.结果 阴性对照组的ALT活性为(30.70±9.93) U/L,AST活性为(68.90±13.54)U/L,小鼠给予CCl4后,ALT活性为(761.60±80.80) U/L,AST活性为(1442.70±546.62)U/L,均高于对照组(P＜0.01);4个批次的清开灵注射液组的ALT活性分别为(378.00±29.47)、(287.80±107.74)、(289.70±26.84)、(312.10±76.22) U/L,AST活性分别为(524.30±241.09)、(400.40±253.71)、(513.80±211.89)和(548.60±263.61)U/L,均显著低于CCl4组(P＜0.01).结论 20 mL/kg可考虑作为限值剂量在CCl4致小鼠急性肝损伤模型对清开灵注射液护肝作用进行药效的限值法测定.     

基于狗肾小管上皮细胞的雷公藤甲素体外肾毒性研究

目的:观察雷公藤甲素对狗肾小管上皮细胞(MDCK细胞)的毒性作用,并初步探讨其对氧化应激的影响。方法:以马兜铃酸A为阳性对照,用0.5,5,50和500 nmol·L-1的雷公藤甲素与MDCK细胞共同孵育24 h后,MTT法检测细胞抑制率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤以及倒置显微镜观察雷公藤甲素对细胞形态的改变。用500 nmol·L-1雷公藤甲素分别与MDCK细胞作用30 min、1 h、2 h、4 h和6 h后,用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞的活性氧自由基(ROS)水平。结果:与阴性对照组比较,雷公藤甲素组的细胞抑制率明显升高(P<0.01);LDH相对释放率明显增加(P<0.01)。雷公藤甲素处理组的细胞形态出现皱缩,呈现为球形,并有部分细胞脱落。雷公藤甲素与MDCK细胞作用30 min后ROS水平达到最高值,然后ROS逐渐减少(P<0.01)。结论:雷公藤甲素可诱导MDCK细胞的毒性作用,其毒性作用机制可能和氧化应激反应有关。