线粒体一氧化氮合酶研究现状

线粒体一氧化氮合酶(mtNOS)催化产生一氧化氮(NO),后者与线粒体呼吸链中的复合物Ⅳ(细胞色素C氧化酶)可逆性地结合,调节跨膜电位(ΔΨ),还可与超氧阴离子反应生成超氧亚硝酸阴离子(ONOO-),引起多种损伤。目前,已经在大鼠和小鼠的肝、胸腺、骨骼肌、心、脑等多个组织器官发现mtNOS。该文就mtNOS的发现、类型以及作用作一综述。     

线粒体一氧化氮合酶与炎症及败血症休克

一氧化氮(NO)和其他细胞因子是炎症和败血症休克中重要的细胞内信使和分子标志物。重症炎症可引发败血症休克,损害组织线粒体。败血症休克分子机制之一就是由于线粒体一氧化氮合酶(mtNOS)持续催化NO生成,导致过量过氧化亚硝酸阴离子(ONOO_)产生,使线粒体功能异常,肌肉收缩功能减弱。在炎症和败血症休克过程中脏器的化学发光(其发射光在440~600nm)与自发光不同,很可能由于NO和ONOO_与其他化学物质反应,形成自由基时所激发的。因此,用表面化学发光法监测原位炎症和氧化应激,是非常客观的指标。     

p38丝裂原激活蛋白激酶对人胚胎肾293细胞一氧化氮合酶基因转录的调控

目的探讨p38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族四种亚型对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的转录调控。方法以人胚胎肾293(HEK 293)细胞为靶细胞,采用脂质体(LPS)介导的细胞基因共转染技术、荧光素酶报告基因技术,分别将FLAG-tagged p38 MAPK 4种亚型、含有鼠iNOS基因启动子区的荧光素酶报告基因质粒(piNOS-Luc)、空载体(pcDNA3)、β-半乳糖苷酶表达质粒(pCMV-β)共转染,检测并比较荧光素酶相对活性。结果(1)未加刺激时,在HEK 293细胞中,p38 MAPK中仅有p38α能够诱导iNOS基因启动子的转录活性;(2)在LPS刺激下,p38 MAPK 4种亚型均能够诱导iNOS启动子的转录活性,其中,p38β所诱导的转录活性最高,p38α的诱导作用亦很明显。结论(1)LPS能够在HEK 293细胞中诱导iNOS基因转录活性;(2)在HEK 293细胞中,p38 MAPK参与了静息时及LPS刺激下对iN-OS基因的转录调控。     

内毒素休克小鼠肺组织ICAM-1的表达及p38 MAPK的调控作用

脂多糖 (ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)是引发内毒素休克的关键因子 ,在内毒素休克病人血浆中可达 10 0～ 10 0 0ｎｇ/ｍｌ(正常人为 10ｎｇ/ｍｌ) [1] 。ＬＰＳ可诱导内皮细胞胞间粘附分子 1(ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ 1,ＩＣＡＭ 1)的表达 ,促进白细胞粘附到内皮细胞。研究表明ＩＣＡＭ 1在肺部炎症级联的激活中起重要作用 ,并导致白细胞的募集[2 ] 。已证实ｐ38丝裂原活化蛋白激酶 (ｐ38ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ ,ｐ38ＭＡＰＫ)在ＬＰＳ激活或…     

p38 MAPK在脂多糖诱导的人内皮细胞表达诱导型一氧化氮合酶中的作用

目的研究p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)在脂多糖(LPS)诱导的人内皮细胞－ECV304诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达和一氧化氮(NO)产生中的作用。方法用Griess法检测人内皮细胞培养液中NO水平,分别用免疫荧光法和 RT－PCR检测细胞 iNOS蛋白和mRNA的表达,采用免疫沉淀法检测细胞 p38 MAPK的活性。结果 与对照组相比,LPS刺激后的BCV304细胞iNOS蛋白和mRNA的表达显著增加,用p38特异性抑制剂SB203580预处理后,可以显著抑制细胞 iNOS的表达和NO的产生。LPS刺激内皮细胞后15 min,p38 MAPK的活性达到高峰,维持45 min后逐渐下降。结论p38MAPK参与了LPS诱导的内皮细胞iNOS的表达和NO的产生;可通过阻断信号转导通路来减少iNOS及其他细胞因子的产生,为败血症休克的防治提供一条新的思路。     

线粒体一氧化氮合酶与炎症和脓毒性休克

炎症的特征性临床症状是：血管舒张(红)、水肿(肿)、发热、痛、功能障碍,这些症状与多种细胞活化后向炎症病灶转移有关,此时体液中含有大量一氧化氮(NO)和炎症细胞因子(白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等)。其中NO是体内重要的生理递质和细胞间、细胞内的化学信使,在炎症反应中扮演了重要的角色。NO可影响炎症的很多方面：根据NO的浓度、NO的潜在形式、病变部位以及靶细胞的反应的不同,既可以促进炎症的发生和发展,也具有抗炎作用。脓毒性休克的特征性表现为低血压、血管反应性降低、     

p38MAPK在LPS诱导的小鼠肺组织诱导性一氧化氮合酶（iNOS） 表达中的作用

革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)在导致休克的同时,可以诱导多个器官和组织iNOS及一系列细胞因子的表达和产生,这些介质在休克发生发展过程中起着重要的作用.然而,参与休克过程的细胞和分子机制到目前为止仍属未知.目的观察LPS诱导小鼠肺组织iNOS表达的变化趋势及信号转导通路--p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在内毒素休克发生发展中的调控作用.方法1)用不同剂量的LPS对小鼠进行不同时间的处理,收集血液后处死小鼠,取肺组织,液氮速冻保存所有样本,采用Griess法检测血浆一氧化氮(NO)水平,分别用Westernblotting和RT-PCR检测肺组织iNOS蛋白和mRNA表达情况.2)复制内毒素休克模型,将戊巴比妥钠(60mg/kg)腹腔麻醉的BALB/c小鼠在立体分离显微镜(SMZ-1B,Nikon)下进行一侧颈动脉插管,与4道生理记录仪连接,记录血压.腹腔注射LPS(5mg/kg),记录血压变化及发生休克的时间.3)用p38MAPK特异性抑制剂SB203580(12.5mg/kg和25mg/kg,口服)对小鼠进行处理1h后,按前述方法复制休克模型,检测血浆NO水平,iNOS蛋白和mRNA的表达.结果1)未经LPS处理时,麻醉小鼠平均动脉压为(127.5±9.0)mmHg;LPS(5mg/kg)处理后小鼠动脉压呈现双峰型进行性下降,6h后平均动脉压降到(42.0±3.0)mmHg,导致重度休克.2)血浆硝酸盐和亚硝酸盐(一氧化氮,NO)的浓度,肺组织中iNOS蛋白及mRNA的表达以及肺组织湿重/干重比值,LPS处理组显著高于对照组.LPS处理4h后iNOS蛋白和mRNA表达,12-48h表达最显著;其中LPS剂量为20mg/kg时,在同一观察时间段与其他剂量组相比,iNOS的表达强度最大.3)经SB203580处理1h后,可以显著降低内毒素休克小鼠血浆NO水平和肺组织湿重/干重比值,并可显著抑制肺组织中iNOS蛋白和mRNA的表达,但是对血压下降并没有显著影响.结论1)LPS可诱导小鼠血浆一氧化氮(NO)水平升高,肺组织中iNOS蛋白和mRNA表达增加,并存在时间和剂量依赖性;2)p38MAPK信号转导通路可能在内毒素休克肺组织iNOS表达中起重要调节作用,提示可以通过抑制信号转导通路来降低iNOS表达及其它细胞因子的产生,可能对内毒素休克时组织损伤的防治有重要意义.     

硒对T—2毒素所致体外培养大鼠肝细胞损伤的影响

通过测定大鼠肝细胞培养液中乳酸脱氢酶、白蛋白及细胞内ＤＮＡ总量，我们对Ｔ—２毒素所致的肝细胞损伤作用及硒对其影响进行了探索。结果表明：Ｔ—２毒素可引起ＬＤＨ升高、白蛋白及ＤＮＡ合成下降；加硒０．１～０．５μｇ／ｍｌ１２小时后上述指标部分恢复。揭示Ｔ—２毒素可造成大鼠肝细胞膜系统的破坏，并由此导致细胞合成能力下降；适量补硒可部分拮抗Ｔ—２毒素的细胞毒作用，其机理可能与硒保护细胞膜的作用有关。     

复方血栓通滴丸对血淤大鼠血液流变学及小鼠凝血时间的影响

 目的 研究复方血栓通滴丸对动物血液流变学和凝血时间的影响。方法 用急性血淤模型大鼠进行血液流变学的实验和用毛细血管法测定小鼠的凝血时间。结果 ①大鼠经皮下注射肾上腺素和冰水冷浴后,其不同切变率全血黏度及血浆黏度均增高。②急性血淤模型大鼠服用复方血栓通滴丸,可降低模型大鼠不同切变率(1 s^-1,5 s^-1,30 s^-1,150 s^-1)下的全血黏度和全血还原黏度。③急性血淤模型大鼠服用复方血栓通滴丸,对模型大鼠血小板最大聚集百分率有一定的抑制作用。④复方血栓通滴丸各剂量组都能显著延长小鼠凝血时间。结论 复方血栓通滴丸具有降低血液黏度、抑制血小板的聚集和延长凝血时间,从而达到改善微循环、防止血栓形成和保护心脑等重要器官的作用。