中山市4 370例新生儿耳聋基因筛查联合听力筛查结果分析

目的综合分析耳聋基因和听力筛查,评估耳聋基因筛查在新生儿听力缺损中的临床应用价值。方法收集2015年11月至2017年10月该院出生的4 370例新生儿脐带血耳聋基因筛查结果,结合听力筛查结果对其中159例阳性病例统计分析耳聋基因突变情况及其对听力临床表型的影响,同时对耳聋基因初筛阳性的49例接受耳聋基因测序的结果进行分析,明确耳聋基因初筛的准确率,探讨其临床应用价值。结果 4 370例新生儿进行耳聋基因突变筛查显示,159例新生儿检验结果为阳性,筛查总携带率为3.64%,其中GJB2、SLC26A4、线粒体12SrRNA、GJB3基因突变百分率依次为62.89%、29.56%、5.66%、1.89%,各基因突变百分率差异有统计学意义(P0.05);159例基因筛查阳性新生儿进行听力学筛查分析显示,两耳均通过率为85.50%,未通过率14.46%;耳聋基因初筛阳性者进行耳聋基因测序30.82%(49/159),其中与初筛结果符合率为98.00%(48/49)。结论耳聋基因筛查可作为临床大规模筛查和辅助诊断非综合征型耳聋患者的有效方法,为临床医师对非综合征型耳聋患儿的早期诊疗提供科学依据和支持,有效降低新生儿耳聋缺陷。     

HSPC238对Hela细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨高表达和干扰HSPC238对Hela细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 将pcDNA3.1-HSPC238高表达和pLL3.7-HSPC238干扰载体分别瞬时转染Hela细胞,然后采用EdU增殖和Transwell侵袭实验,检测HSPC238对Hela细胞增殖和侵袭能力的影响.结果 与对照组相比,转染了pcDNA3.1-HSPC238质粒的Hela细胞增殖和侵袭能力下降,转染了pLL3.7-HSPC238质粒的Hela细胞增殖和侵袭能力增强,以上结果均有统计学差异(P＜0.05).结论 HSPC238高表达时能抑制Hela细胞的增殖和侵袭,干扰HSPC238时促进Hela细胞的增殖和侵袭.     

PSMA7 对A549 细胞中RB 途径的影响

目的:探究高表达和干扰PSMA7 对A549 细胞周期以及RB 途径中Cyclin D1、CDK4、P16、Rb 蛋白水平的影响。方法:将pcDNA3.1-PSMA7 高表达和pGPU6/ Hygro-PSMA7-265 干扰载体分别瞬时转染A549 细胞,然后用流式细胞仪检测PSMA7 对细胞周期的影响,再通过Western blot 实验检测Cyclin D1、CDK4、P16、Rb 的蛋白水平。结果:和对照组相比,PSMA7 高表达时周期时相分布无明显差异,但Cyclin D1、CDK4 的蛋白表达水平明显降低,P16、Rb 的表达明显增高;和对照组相比,干扰PSMA7 后细胞的G0/ G1、G2/ M 期比例均降低,而S 期的值增高,均具有差异,而Cyclin D1、CDK4 的蛋白表达水平明显增加,P16、Rb 的表达明显降低,以上结果与对照组相比差异均有统计学意义。结论:PSMA7 在A549 肺腺癌细胞中能够影响RB 途径中Cyclin D1、CDK4、P16、Rb 的蛋白水平的表达,干扰PSMA7 使A549 细胞较早进入S 期。     

HSPC238相互作用蛋白RPL5的初步筛选北大核心CSCD

目的:构建HSPC238诱饵载体,筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。方法:基因合成法合成HSPC238基因,sfi IA和sfi IB双酶切后与pGBKT7诱饵载体连接,获得诱饵质粒pGBKT7-HSPC238,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7共同转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-HSPC238的自激活作用,进一步从人胎肝c DNA文库中筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。结果:诱饵载体pGBKT7-HSPC238构建成功,经表型筛选检测无自激活作用,经酵母双杂交技术结合文献分析,从人胎肝c DNA文库中初步筛选发现核糖体蛋白L5(Ribosomal protein L5,RPL5)可能是HSPC238相互作用的目标蛋白之一。结论:成功构建pGBKT7-HSPC238诱饵质粒载体,且经酵母双杂交技术结合文献分析发现RPL5可能是与HSPC238相互作用的目标蛋白之一。     

HSPC238 在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达与意义

目的:检测HSPC238在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达。方法:收集76例宫颈癌、105例CIN及28例正常宫颈标本,采用免疫组织化学的方法检测HSPC238的表达,比较不同组织中HSPC238表达的差异。结果:正常组织和癌组织中的HSPC238的表达强度无显著差异(Z=-0.242,P0.05)宫颈上皮内瘤变组织(CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ)与正常组织有显著差异(χ2=19.159,P0.01),并且发现HSPC238的表达与CIN的分级存在显著相关性,随着CIN级别升高,染色程度降低(rs=-0.327,P0.01)。结论:HSPC238的低表达与宫颈肿瘤的发生发展可能有一定关系。     

HSPC238 对HMOX1、RPS27a、MT2A、UBB 调节的初步研究

目的:探讨HSPC238过表达或低表达对目标蛋白(HMOX1、MT2A、UBB、RPS27a)的调节作用及其调节途径。方法:分别构建HSPC238的干扰载体及高表达载体,脂质体法转染HEPG2细胞株,RT-PCR、Western blot检测HSPC238及目标蛋白的mRNA、蛋白的表达量;进一步用目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组另以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,镍柱纯化目标蛋白,以HSPC238做免疫印迹,检测目标蛋白累积情况。结果:外源性干扰HSPC238后HMOX1、MT2A、RPS27a表达下调较明显,外源性过表达HSPC238后MT2A、UBB、RPS27a表达水平明显上调;目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,与对照组比较,泛素化的目标蛋白条带明显增加。结论:过表达HSPC238可上调MT2A、UBB、RPS27a的表达,干扰HSPC238可下调HMOX1、MT2A、RPS27a的表达;HSPC238可能通过泛素蛋白酶体途径(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)对目标蛋白发挥调节作用。     

HSPC238对肝癌细胞中RB基因表达的影响

目的观察HSPC238对肝癌细胞中RB mRNA和pRb蛋白水平的影响。方法将PcDNA3.1-HSPC238质粒和PLL3.7-HSPC238干扰载体分别转染HepG2细胞,用实时荧光定量PCR的方法检测RB mRNA的表达量;采用Western blotting法检测pRb蛋白的表达。结果和对照组相比,转染高表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb表达量也增加;相反地,和对照组相比,转染低表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb蛋白的表达量也减少。以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。结论在HepG2细胞中HSPC238对RB基因的表达存在正向调控作用。     

中山地区新生儿先天性甲状腺功能减低症筛查结果分析

目的探讨不同性别、胎龄、出生体质量新生儿与先天性甲状腺功能减低症(CH)患病的关系及其促甲状腺激素(TSH)水平人群分布特点,指导临床筛查工作。方法对2014-2018年中山地区新生儿CH筛查结果进行回顾性分析,采用单因素分析比较不同性别、胎龄、出生体质量新生儿间CH发病率差异及TSH水平人群分布情况。结果筛查239006例新生儿,确诊CH 139例,发病率为0.058%(139/239006)。过期产儿CH发病率高于足月儿,差异有统计学意义(P<0.05)。新生儿TSH水平呈右偏态分布,不同性别、胎龄、出生体质量新生儿TSH水平单侧95%参考值范围均不同,各组人群TSH水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论新生儿疾病筛查能有效帮助CH患儿早期诊断,过期产是CH发病的影响因素,临床医生在实际工作中还可将新生儿TSH水平人群分布特点纳入参考,做好CH的筛查工作。     

RPS27a蛋白重组质粒的构建及其在肝癌细胞株的定位

目的:构建pcDNA3.1-RPS27a重组质粒载体并观察其在HepG2和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况.方法:使用基因合成法合成RPS27a基因,将扩增后的目的基因连接至pcDNA3.1载体.转化DH5α大肠埃希菌后,进行质粒抽提然后电泳及测序鉴定.将鉴定后的pCDNA3.1-RPS27a质粒分别转染HepG2和SMMC7721细胞株,通过激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况.结果:pCDNA3.1-RPS27a 重组质粒构建成功.通过激光共聚焦显微镜观察发现RPS27a主要表达于HepG2和SMMC7721细胞的胞质中.结论:pCDNA3.1-RPS27a载体构建成功,证实了RPS27a主要表达于HepG2和SMMC7721细胞的细胞质中.     

血红蛋白A2在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的截断值及应用

目的分析该实验室血红蛋白A2(HbA2)筛查珠蛋白生成障碍性贫血(又称地贫)的最佳截断值及其应用价值。方法回顾性分析2016年1-12月来该院进行地贫筛查的育龄夫妇的血液标本,通过毛细管电泳法检测HbA2水平,以基因检测结果为诊断金标准,绘制HbA2用于α和β地贫诊断的受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积、最佳截断值,以及相应的灵敏度、特异度。结果 ROC曲线分析显示,HbA2诊断α地贫的曲线下面积为0.766,最佳截断值为≤2.45%,其对应的灵敏度为75.4%,特异度为72.0%。HbA2诊断β地贫的曲线下面积为0.984,最佳截断值为≥3.55%,其对应的灵敏度为96.20%,特异度为99.20%。结论利用ROC曲线建立了该院HbA2筛查α和β地贫的最佳截断值,曲线下面积表明HbA2诊断β地贫的准确度较高,而诊断α地贫的准确性处于中等水平。