蛇血清分泌型磷脂酶A_2抑制剂防治人炎症的生物信息学分析

目的比较人和蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)结构相似性,分析蛇血清磷脂酶A2抑制剂(PLI)对sPLA2特异性抑制的结构与功能关系,评价蛇血清PLI对人炎症的抑制作用。方法用Clustal W2对人和五步蛇sPLA2氨基酸序列进行多重序列比对。用Swiss-model对各种sPLA2的空间结构进行同源建模预测,并用Chimera软件对人和蛇毒sPLA2空间结构进行三维比对。结果人和五步蛇sPLA2一级序列同源性有40%左右,空间结构几乎相似。各种PLI具有相同的空间结构特征和保守的sPLA2结合区。结论理论上推断蛇血PLI可有效抑制人sPLA2活性,减少sPLA2介导的炎症发生。     

华游蛇PLIγ模拟肽的设计与活性验证

目的设计华游蛇血清PLIγ模拟肽并研究其对PLA2抑制作用。方法用RT-PCR方法克隆华游蛇PLIγ基因并测序进行序列比对。基于华游蛇PLIγ序列设计一个长度为19个氨基酸的多肽。利用Auto dock分子对接分析该19肽与sPLA2相互作用,运用琼脂糖平板法验证其对sPLA2的抑制效果,并通过小鼠实验进一步检测其抗sPLA2出血毒性。利用LPS诱导小鼠Raw264.7细胞炎性反应,检测细胞花生四烯酸含量以评价19肽对细胞sPLA2酶活性抑制作用。结果设计得到的华游蛇PLIγ模拟肽序列为PGLPLSYPNGGGGSVAFRS。该19肽较好地抑制蛇毒PLA2酶活性和出血毒性,并可以显著减少LPS诱导Raw264.7炎性细胞中花生四烯酸含量,IC50为86.3μmol/L。结论本文设计的华游蛇PLIγ模拟肽,具备了天然PLIγ的活性,具有抗细胞炎性反应和蛇毒出血毒作用。     

蛇毒C型凝集素家族结构及抗原表位预测

目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。     

江西常见蛇血清中抗蛇毒sPLA_2蛋白的筛选与纯化

为研究特异性解蛇毒和抗炎症蛋白质药物,对6种江西常见蛇种血清sPLA2抑制蛋白进行筛选和分离纯化。利用实验室前期纯化的五步蛇毒sPLA2作为靶酶,以琼脂糖平板法和pH动态监测法联合筛选江西常见蛇种血清sPLA2抑制剂。基于初筛结果和资源量,确定以华游蛇血清为原料,分离纯化sPLA2抑制剂。分离过程包括Source 30Q、超滤、Uno Q柱精纯化等3个步骤,目的组分经SDS-PAGE分离,显示含有2个亚基,相对分子质量为25.4 ku和21.2 ku。结合文献初步推测该蛋白可能为-γPLI。