构建人端粒酶反转录酶修饰的永生化大鼠骨髓间充质干细胞株

背景：骨髓间充质干细胞具有取材方便、多向分化及低免疫原性等优点,是转基因细胞移植镇痛领域中的理想载体细胞,但由于骨髓中间充质干细胞含量有限、体外培养的复制性衰老等问题,制约其在镇痛研究中的应用。 目的：构建永生化大鼠骨髓间充质干细胞株,为转基因细胞移植镇痛提供载体细胞来源。 方法：构建携带人端粒酶反转录酶基因的慢病毒pLV-Puro-EF1α-hTERT并转染第3代骨髓间充质干细胞后进行嘌呤霉素筛选,获得阳性细胞克隆并扩大培养,分别采用RT-PCR和TRAP法检测转染细胞人端粒酶反转录酶的表达和端粒酶活性,同时观察细胞形态、增殖和诱导分化能力、表面分子以及Nestin、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达,检测细胞染色体核型和致瘤性。 结果与结论：人端粒酶反转录酶基因修饰的骨髓间充质干细胞可以体外连续培养超过30代。与未转染的细胞和对照病毒转染的细胞相比,慢病毒转染的骨髓间充质干细胞人端粒酶反转录酶mRNA表达、端粒酶活性以及细胞增殖能力均提高,细胞周期主要处于G2/M以及S期,增殖指数明显升高;细胞表面分子CD29、CD44、CD90表达阳性率大于70%,而CD34、CD45表达阳性率不足5%,胞浆Nestin的表达阳性,而MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ未见表达,保留了干细胞成骨、成脂、成神经的分化能力,细胞形态、染色体核型均正常,裸鼠接种无致瘤性。以上结果提示成功构建了人端粒酶反转录酶基因修饰的永生化大鼠骨髓间充质干细胞株,为转基因细胞移植用于镇痛研究提供了生物学性状均一、稳定的安全载体细胞。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

羊驼噬菌体展示纳米抗体库中Lea模拟抗原表位筛选与鉴定的初步研究

目的:建立一种新型Lewis血型抗原的合成方法,即利用羊驼噬菌体展示纳米抗体库筛选Lewis血型抗原的模拟表位,并将模拟表位序列进行生物合成。方法:用单克隆抗Lewis a (Le^a)抗体亲和淘选羊驼噬菌体展示纳米抗体文库来选择Le^a抗原的模拟表位。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对阳性克隆菌与筛选原Le^a单克隆抗体的亲和力进行检测,选择高亲和力的阳性克隆菌进行测序,并对最终确定的序列进行表达合成。最后通过ELISA法对合成后的Le^a模拟抗原进行灵敏度、特异度以及临床样本的验证。结果:随机挑取96个噬菌体克隆,有24个阳性克隆,并选取亲和力最强的前14个噬菌体克隆进行测序,结果显示有5个不同序列,选取出现频率最高、差异最大、亲和力最高的3条序列进行表达合成。利用ELISA法检测筛选得到的Le^a模拟抗原的灵敏度及特异性,发现微柱凝胶法与ELISA法的最低检出限相差25倍,且Le^a模拟抗原与其他5种单抗(anti-A, anti-B, anti-P1, an...     

296例医院内真菌感染分析

目的:了解住院患者深部真菌感染的发生情况.方法:采用回顾性分析方法,对我院2010年2 -12月间的真菌感染病例进行回顾性分析.结果:真菌感染296例;感染以念珠菌属为主,占90.54％,念珠菌属中感染占前三位的分别是白色念珠菌(54.73％)、热带念珠菌(13.18％)、光滑念珠菌(7.09％);真菌感染涉及的科室共有26个,其中,呼吸科感染例数居首,占33.78％;所有真菌感染病例均患有基础疾病,其中患肺部疾病的真菌感染率居首,占32.43％,肿瘤伴发的真菌感染死亡率最高,感染83例,死亡13例,死亡率为15.66％;在治疗上,应用的药物有氟康唑、卡泊芬净、伊曲康唑、伏立康唑、米卡芬净,其中氟康唑应用最频繁,达77.03％;真菌感染伴细菌感染的患者193例,占65.20％;大部分患者接受了侵入性操作.结论:对高龄、患严重基础疾病、需侵入性治疗的患者应采取适当的预防真菌感染的措施,合理选择药物,加强病原菌的监测,尤其对合并感染更要加强警惕,积极治疗,以减轻患者的痛苦.     

基于壳聚糖和聚乙二醇的新型负载冻干PRP止血抗菌凝胶

目的:制备负载冻干富血小板血浆-壳聚糖/双端苯甲醛基聚乙二醇动态凝胶(LPRP-CP),通过体内外试验探讨其止血抗菌及促进烫伤创面愈合作用。方法:本研究设置普通纱布/空白药片对照(Ctrl)、壳聚糖护创粉(Chito P)、LPRP-CP和ChitoGauze XP PRO(Chito G)共4组。通过建立兔耳动脉出血模型及背部皮肤浅Ⅱ°烫伤模型,计算止血时间、出血量及观察烫伤愈合的大体及组织学结果,评价4组材料的止血效果和促愈合作用;通过体外抗菌试验,评价4组材料的抗菌效果。结果:在兔耳动脉出血模型中,各组材料均止血成功。Ctrl、Chito P、LPRP-CP和Chito G组止血时间分别为213.33±38.30、118.33±24.01、115.00±8.37和111.67±11.69 s,出血量分别为1233.83±992.27、346.67±176.00、193.33±121.47和147.50±80.66 mg。与Ctrl比较,Chito P、LPRP-CP和Chito G组的止血时间显著缩短(P<0.001),LPRP-CP组和Chito G组的出血量减少(P&l...