CTLA-4-FasL融合分子的构建及其生物学特性的鉴定

文章通过特异的引物分别扩增出CTLA 4和FasL胞外区的cDNA ,将它们拼接后 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,进行表达、纯化 ,获得CTLA 4 FasL融合蛋白。Westernblot分析显示了该融合蛋白具有CTLA4 胞外区和FasL胞外区的抗原性。体外试验表明 ,该融合蛋白可以结合Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的B7分子 ,表明了该分子双特异性的特点。该融合蛋白能够直接诱导Jurkat细胞发生凋亡 ,且此凋亡效应伴随Raji细胞的参与而增强 ,初步证实了该分子的免疫抑制效应 ,从而为进一步研究该融合蛋白特性及应用奠定了基础。     

Acceleration of Immune Reconstitution after Bone Marrow Transplantation in Mice by Bone Marrow Stromal

To observe potential effect of the engineered bone marrow stromal cell line QXMSC1 secreting IL-6 (QXMSCIL-6) on accelerating immnune reconstitution in syngeneic bone marrow transplantation in mice, QXMSC1 was transfected with the eukaryocytic expression vector pcDNAIL-6, which contained hIL-6 cDNA by liposome-mediated gene transfecting technique. G418-resistance clone was selected by limiting dilution. The highest secreting clone was selected by ELISA assay and used in animal experiments. The recipient mice (BALB/c) were lethally irradiated and cotransplanted syngeneic bone marrow (10^7/mice) and the QXMSCIIL-6 (5×10^5/mice). Lymphocyte proliferation induced by ConA and LPS, helper T lymphocyte precursor (HTLp), cytotoxic T lymphocyte precursor (CTLp), plaque-forming cell (PFC), delayed type hypersensitivity (DTH) were examined 30, 60 days in post transplantation respectively. The results showed that lymphocytes proliferation to ConA and LPS, HTLp, CTLp increased, DTH and PFC were improved by cografted stromal cells QXMSCIIL-6 on 30, 60 days after BMT. These results demonstrated that the bone marrow stromal cell line QXMSC1 IL-6 transfected with IL-6 (QXMSC11L-6) accelerated immnune reconstitution in syngeneic bone marrow transplantation.     

成年大鼠胰岛的体外基因转染

目的 探讨携带外源基因的慢病毒在体外有效感染胰岛及外源基因在胰岛中的表达，为通过移植前向胰岛细胞转入特定的免疫调节分子基因诱导胰岛移植物耐受奠定基础。方法 将目的基因CTLA4Ig导入慢病毒载体pWPTS，构建成pWPTS-CTLA4Ig载体。用磷酸钙沉淀法将pWPTS-EGFP、pWPTS-CTLA4Ig分别和其辅助载体pMD2．G、pCMVΔ8．92共转染293T细胞，收获病毒上清液，测定病毒滴度后感染新分离的胰岛。通过Western Blot测定胰岛培养上清液中CTLA4Ig蛋白的表达。结果 ①成功构建了携带CTLA4Ig基因的慢病毒载体pWPTS-CTLA4Ig；②包装产生的慢病毒Lenti-EGFP、Lenti-CTLA4Ig在体外可以感染胰岛，其中在Lenti-EGFP慢病毒感染的胰岛观察到了绿色荧光，及在Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛培养上清液中检测到了CTLA4Ig蛋白的表达。结论 慢病毒在体外可以有效感染大鼠胰岛，且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达，其中Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛为进行胰岛移植并诱导体内特异的胰岛移植物耐受奠定了基础。     

两种不同利什曼原虫混合感染人体U-937细胞

利什曼病临床表现的较大差异,可能是由于不同种的利什曼原虫混合感染同一巨噬细胞后,发生基因重组现象造成的。本文作者用不同的活性荧光染料分别标记不同种的利什曼原虫的前鞭毛体,分别以单种和双种方式感染人巨噬细胞U-937,并用流式细胞仪对感染细胞进行分离和分析。     

双特异性抗体的应用

本介绍了双特异性抗体在肿瘤的治疗与诊断、治疗血栓性疾病及免疫分析等方面的应用进展。     

CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合供体细胞输注诱导混合嵌合体和大鼠心脏移植耐受

目的　在心脏移植手术中实施CTLA 4Ig腺病毒基因治疗并联合术后输注供体骨髓细胞 ,诱导异基因大鼠心脏移植耐受 ,并对相关机制进行研究。方法　将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠 ,同时经门静脉输注供体DA的脾细胞 (SC ,3× 10 8)、CTLA 4Ig腺病毒 [( 1～ 5 )× 10 9PFU ml],第 4天由舌静脉输注DA的骨髓细胞 (BMC ,3× 10 8)。观察、记录心脏移植物的存活时间。并对皮肤移植的受体作同样处理 ,观察皮肤移植存活情况。通过MLR、IL 2逆转实验及嵌合体的测定 ,探讨耐受机理 ,并检测了CTLA 4Ig的体内表达、TH1 TH2型细胞因子的表达。结果　单用CTLA 4Ig腺病毒基因治疗 ,或CTLA 4Ig腺病毒基因治疗联合单独的供体脾细胞或骨髓细胞能不同程度地延长异基因心脏移植物的存活 ,但不能延长皮肤移植物的存活。脾细胞、CTLA 4Ig腺病毒和骨髓细胞(SC Ad BMC)处理组的心脏移植物存活时间明显超过其它各耐受诱导组 ,并且能够诱导皮肤耐受。RT PCR实验证明 ,在受体内不同的组织CTLA 4Ig基因的表达量有所不同 ,并且随着时间的推移表达下降。TH1和TH2型细胞因子的检测显示 ,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象。MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性降低 ,IL 2逆转实验、嵌合体检测表明 ,该耐受可能与     

俄罗斯及其周边国家多房棘球绦虫的感染状况

多房棘球绦虫引发的泡型包虫病是危害最严重的人兽共患病之一,人类可因接触感染动物及其皮毛或污染了多房棘球绦虫虫卵的水土、浆果和用具而感染。 在俄罗斯及其周边国家,多房棘球绦虫的终宿主是以狐和北极狐为主的9种肉食性动物,中间宿主是以啮齿动物为主的30多种哺乳动物。不同地区因生态和经济条件的差异,往往以一种或另一种动物作为主要的终     

简易小鼠固定器的制作

实验中对小鼠进行尾静脉注射时 ,常需人帮助固定小鼠。为此 ,我们利用旧塑料离心管为材料 ,制作了一种简易的小鼠固定器 ,现介绍如下 :取５０ｍＬ旧塑料离心管１支 ,相当大小的软木塞１个及适宜大小的塑料片１块。在距管口１／３处开始间隔钻孔（直经约２～３ｍｍ）至管底 ,并根据不同鼠龄的体长在距管口处锯一狭口。再将软木塞锯成一Ｖ字形开口即可。使用时 ,根据小鼠的体长 ,在上述离心管的相应狭口处插入塑料片 ,将小鼠装入管中 ,塞上软木塞 ,让小鼠尾巴露于管外 ;再将离心管固定于操作桌面上以防滚动 ,即可进行小鼠尾静脉注射。该固定器…     

猪蛔虫卵在实验室和模拟现场条件下存活状况的研究

猪是猪蛔虫卵的主要宿主,草场施以含有活的猪蛔虫卵的粪肥时,可导致牛和绵羊感染猪蛔虫。为此,本文作者研究了猪蛔虫卵在不同条件下的存活率。 试验Ⅰ:在猪粪泥中,将含10000只猪蛔虫卵粪便的有孔塑料管,置于粪泥堆内1.2米深处,粪堆的温度为10—17℃,pH平均为7.7。试验Ⅱ:在厌氧条件下,将含10ml水和250只猪蛔虫卵的平皿,置于15℃的Gaspak厌氧罐中。试验Ⅲ:在不同相对湿度(rH)条件下,将含沙和250只猪蛔虫卵的平皿,分别置于rH为100％,77.5％,47.5％,7.5％,温     

鞭虫的抗原变异性

本文首次研究了鞭虫的抗原变异性。作者将从3个重度感染儿童检获的雌、雄鞭虫成虫各8条(分别编号为虫群1,虫群2,虫群3)制成粗提物,经SDS-PAGE后与两份鞭虫性痢疾综合症(Trichuris dysentery syn-drome)患儿的血浆(编号为A和B)进行免