STCl过表达对宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响

【目的】研究转染STCl基因对人宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响。【方法】通过MTT、集落形成、划痕实验、Tranwell实验、裸鼠成瘤等方法检测STCl基因转染对宫颈癌CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、体内成瘤能力的影响。【结果1MTT和集落形成实验表明,与空载体组相比,CaSki／STCl细胞生长受到抑制,细胞存活率和集落形成率较低（P〈0．05）。划痕实验显示CaSki／STCl较CaSki／NC组细胞迁移率降低（35±3．2％ VS 64±4．5％,P〈0．05）。TranweⅡ实验显示CaSki／NC的85±5,而CaSki／STCl组穿膜细胞数较少为54±4（P〈0．05）。裸鼠成瘤实验显示,CaSki／STCl组和CaSki／NC组的肿瘤平均质量依次为（O．285士0．057）g、（0．523±0．154）g,差异具有统计学意义（P,0．01）。【结论】sTCl过表达抑制宫颈癌细胞增殖、转移及侵袭,STCl基因可用于宫颈癌的基因治疗。     

利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库

目的利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库,为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础。方法采用SuperSMART和SSH技术,以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester,地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver,分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段;连接T载体,转化宿主菌,构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库。结果经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆,以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆,结果显示其中288个克隆有插入片段,阳性率为96％,大小分布在0．2—1．0kb间。结论本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库,为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础。     

全人源鼻咽癌抗独特型抗体I50的原核表达及活性鉴定

目的:用基因工程手段获得有活性的抗独特型抗体I50,并在体外鉴定其活性.方法:以fuse5-I50为模板,用PCR方法扩增出抗独特型抗体I50基因,并将其插入到pET25b(+)中构建原核表达载体pET25b-I50.含有重组质粒pET25b-I50的菌株E.coli BL21(DE3)经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖...     

人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定

目的:构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体,并对其产物作初步鉴定。方法:利用分子克隆技术依次将G22,I50插入到原核表达载体pET25b(+)中,经菌落PCR,双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后,表达的重组蛋白经His-tag纯化试剂盒纯化后复性。用Westernblot方法鉴定G22-I50双价蛋白的表达,ELISA方法分析其蛋白活性,并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果:构建的原核表达载体pET25b-G22-I50经测序验证,序列正确。双价蛋白G22-I50以包涵体形式高效表达,经纯化后纯度达90%以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量(Mr)约42000,与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性,并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论:成功获得了有活性的双价抗独特型抗体,为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。     

STC 1 过表达抑制人宫颈癌CaSki 细胞增殖

目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组：实验组转染pcDNA3.1（＋）-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1（＋）空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高（P﹤0.01）,CaSki细胞存活率下降（P﹤0.05）,G1期细胞比例显著上升（P﹤0.05）,细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。     

人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)

目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量...     

肿瘤抗原在肿瘤研究中的应用

近年来随着肿瘤抗原筛选鉴定方法的多样化,已鉴定出了大量的肿瘤抗原,抗原的分类越来越全面,肿瘤抗原的基础性研究已经深入到其他学科,肿瘤抗原的检测诊断则在临床上应用越来越广泛,而针对不同抗原的免疫治疗也更加具体可行.     

外泌体在肺癌中的研究进展

外泌体是细胞衍生的纳米囊泡,直径30-150 nm,包含核酸、蛋白质和脂质等组分。外泌体可进行细胞间通讯并激活靶细胞中的信号通路,参与机体生理及病理过程。目前国内外对于外泌体与非小细胞肺癌发生发展的研究,主要集中于细胞免疫反应、生长、转移和耐药等方面。此外由于外泌体的双亲特性,外泌体是用于癌症治疗的天然药物递送载体。本综述就外泌体一般情况、提取方式、生物功能、外泌体对肺癌免疫、增殖、上皮间质转化(EMT)、血管形成、靶器官转移、治疗的作用,以及未来发展方向等几方面展开论述,为阐明肺癌的发生发展提供新思路,对指导肺癌的早期诊断和治疗提供新方法。     

HPV和肺癌关系的研究进展

肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,近50年来其发病率和死亡率呈现不断上升趋势,肺癌的发病率和死亡率在世界范围内均居各种癌症首位。肺癌的危险因素是多方面的。吸烟是其中一个重要风险因素,但不吸烟者(特别是女性)仍有一部分会患肺癌。许多研究认为人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是肺癌的危险因素。然而,HPV作为肺癌的风险因素,对其进行的全面认真的评估较少。由于检测方法、地区分布、样本量等存在差异造成HPV感染和肺癌的相关性研究结果也不尽相同。近年来,随着研究的不断深入,HPV与肺癌的关系日益受到重视。现将近年关于HPV和肺癌关系的研究进展作一简要综述。     

全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库的构建

【目的】构建全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库。【方法】采用体外致敏、EBV转化技术,PCR技术,噬菌体展示技术。【结果】构建了库容量达4×10^9的全人源抗结肠癌噬菌体ScFv库,ScFv基因的插入率为90％。【结论】体外致敏联合EBV转化及噬菌体展示技术制备抗结肠癌单链抗体库,这一策略是完全可行的,为进一步筛选抗结肠癌特异性单链抗体奠定了基础。