利用激光扫描共聚焦显微镜实时监测体外诱导分化的人骨髓间充质干细胞内游离Ca2+浓度动态变化

目的 利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)实时监测由人骨髓间充质干细胞(hMSC)诱导分化的心肌样细胞内游离Ca2+浓度的动态变化.方法 体外分离培养hMSC,5-氮胞苷诱导向心肌样细胞分化.分别以体外分离培养的原代搏动的出生2 d SD大鼠乳鼠心肌细胞(CM)和同代次的hMSC为阳性对照和阴性对照.Fluo-3/AM荧光探针分别标记hMSC、由hMSC诱导的心肌样细胞及CM,利用LSCM实时监测单细胞内Ca2+动态变化的优势,观察加入心脏正性肌力药物后的细胞反应及细胞内Ca2+水平的动态变化.结果 静息状态下(给药前),搏动的CM荧光强度有变化,而hMSC及心肌样细胞Ca2+的荧光强度保持在稳定的波动水平内,两者差异无统计学意义.给药后,hMSC的Ca2+离子流没有改变,与静息状态下趋于一致;而心肌样细胞则表现出一个明显的Ca2+离子流,且下降后细胞内Ca2+水平明显高于加药前静息钙水平,其Ca2+离子流的表现趋势与搏动的CM基本一致.比较给药后hMSC与心肌样细胞的Ca2+荧光强度落差值,差异具有统计学意义(64.04 ±22.68比180.75 ±34.04,P<0.01).结论 hMSC经5-氮胞苷诱导后,在电学特性方面具有向CM分化的趋势,心肌样细胞与CM具有某些相同的电生理特性.     

神经内镜手术与软通道穿刺引流术治疗高血压性脑出血的随机对照研究*

目的比较神经内镜颅内血肿清除术(NEIHE)与软通道血肿穿刺引流术(SCPD)治疗高血压性脑出血(HICH)的临床疗效与预后。方法将2015年1月-2016年12月收治的106例HICH病例按照随机数字法分为神经内镜组(51例,NEIHE方案)与穿刺引流组(55例,SCPD方案),记录手术及并发症指标,比较外周血炎性因子与神经功能缺损评分变化,对比两组术后疗效。结果神经内镜组手术时间和术中失血量高于穿刺引流组[(108.5±33.8)vs(85.8±25.4)min、(54.2±17.7)vs(42.6±14.5)ml,P0.05],但术后48 h血肿清除率和术后总体并发症发生率均明显优于穿刺引流组[(85.8±7.8)%vs(74.7±9.2)%、13.7%vs 29.1%,P0.05]。术后14 d,神经内镜组外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)下降数值均明显高于穿刺引流组[(129.5±33.7)vs(107.8±29.5)pg/ml、(74.3±22.8)vs(56.7±18.2)pg/ml、(32.6±7.5)vs(27.2±6.6)mg/L,P0.05]。术后14 d,神经内镜组美国国立卫生院脑卒中量表评分(NIHSS)下降数值较穿刺引流组更为明显[(13.0±3.8)vs(10.3±3.5),P0.05]。术后6个月,神经内镜组存活病例Barthel指数提高数值明显高于穿刺引流组[(44.8±9.7)vs(39.5±11.2),P0.05]。结论 NEIHE较SCPD治疗HICH虽然手术操作相对复杂,但血肿清除率更彻底,并发症更少,近期疗效及预后均具备明显优势。     

牛磺酸对果糖诱导的高血压胰岛素抵抗大鼠红细胞L-精氨酸/一氧化氮途径的影响

目的和方法:在4%果糖引起大鼠胰岛素抵抗高血压模型上,观察红细胞L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮(NO)途径的改变,并观察牛磺酸对其改变的影响。结果:饮用果糖大鼠血压、血糖、血浆胰岛素水平明显高于对照大鼠的同时,红细胞对L-Arg总的转运及Y⁺载体转运的最大转运速率(V_max)分别低于对照大鼠31%和37％(P＜0.01);米氏常数(Km)分别比对照大鼠高35%和30%(P＜0.01)。红细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性、cGMP水平和血浆NO含量明显低于对照大鼠(P＜0.01)。应用牛磺酸治疗可明显逆转上述改变(P＜0.01)。结论:胰岛素抵抗高血压大鼠存在有红细胞L-Arg/NO系统的功能障碍,牛磺酸可显著提高红细胞对L-Arg的转运速率和NOS活性。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及其膜表面电压依赖型钙通道的研究

目的 分离培养人骨髓间充质干细胞(hMSC),用膜片钳技术观察其膜表面电压依赖型钙通道.方法 取人骨髓血,用Percoll(1.073 g/ml)密度梯度离心及贴壁筛选结合的方法,体外培养扩增hMSC.台盼蓝拒染法计数活细胞数.流式细胞仪分析其免疫表型及细胞周期.用膜片钳技术观察hMSC膜表面电压依赖型钙通道的表达情况.结果 hMSC传代后形态上均为紧密排列的成纤维细胞样结构,细胞活力检测达99%.流式细胞检测表明,hMSC表达CD44、CD105,不表达CD31、CD34和CD45.细胞周期检测显示传代后的hMSC处于G1/G0期的细胞为81.52%,处于G2、M和S期的细胞约占18.48%,G2/G1为1.67.膜片钳检测显示,在20个记录中,有6个细胞可记录到对nifedipine敏感的内向钙电流,当激活电压大约在-40 mv时,最大内向峰值电流(Ica-Peak);在-0 mV为(96.67±13.50)pA,当加入5 μmol/L nifedipine,峰值钙电流为(47.75±11.24)pA,显著受到抑制(P＜0.05).结论 体外分离培养扩增的hMSC细胞活力强,主要为静止期细胞,其细胞膜表面存在电压依赖性钙通道.     

病理生理实验教学模式的改变

建立了交互式实验教学网络 ,在交互式实验网络教学系统开通时 ,主机将指导学生进行实验 ,各工作站的操作系统不受主机控制可独立作业 ,实验过程中通过网络将成功的实验数据和标准的曲线存入主机。 95 %以上学生对这种交互式实验教学网络系统非常满意     

2型糖尿病合并泌尿系感染病原菌的耐药性分析

目的探讨2型糖尿病合并泌尿系感染病原菌的构成及耐药情况。方法采用安徽恒星HX—21细菌鉴定药敏分析仪对某院2007年1月～2010年3月218例门诊及住院2型糖尿病患者合并泌尿系感染病原菌进行鉴定及药敏分析。结果 218株病原菌中,以大肠埃希菌为主(50.46%),其次是肺炎克雷伯菌(11.47%)、铜绿假单胞菌(9.17%)、金黄色葡萄球菌(8.26%)、粪肠球菌(7.34%)、真菌(5.5%)、变形杆菌(4.13%)、凝固酶阴性葡萄球菌(3.67%)。革兰阴性杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南及哌拉西林/他唑巴坦耐药率较低,万古霉素对革兰阳性球菌具有较高敏感性。结论 2型糖尿病患者泌尿系感染发病率高,病原菌多为条件致病菌,应及时做尿培养,根据药敏结果选用抗菌药物。     

显微镜与神经内镜下单鼻孔经鼻蝶手术治疗功能性垂体瘤的疗效及对激素的影响

目的:探究显微镜与神经内镜下单鼻孔经鼻蝶手术治疗功能性垂体瘤的疗效及对激素的影响.方法:病例来源于我院神经外科2013年2月至2015年2月收治确诊的功能性垂体瘤病患134例.所纳入病例均按照随机数字表法均分为A组和B组,每组各为67例,给予A组神经内镜下单鼻孔经鼻蝶手术,B组则给予显微镜下单鼻孔经鼻蝶手术.观察比较两组患者的术中出血量、血液激素水平等指标.结果:A组激素恢复正常情况、术后住院时间、总体健康评分、肿瘤完全切除率及并发症发生率均优于B组,差异存在统计学意义(P＜0.05);B组激素下降程度超过50％病例数优于A组,差异存在统计学意义(P＜0.05).结论:神经内镜下经鼻蝶手术相较于显微镜手术,在治疗功能性垂体瘤时临床疗效更佳,且能显著改善垂体的激素水平,具有重要的临床应用价值.     

VEGF/PTEN及下游信号通路在侵袭性垂体瘤中的表达及其临床意义

 目的 探讨侵袭性垂体瘤中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)与人第10号染色体缺失的磷酸酶 (gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten, PTEN)表达水平及其下游信号通路的变化的临床意义。方法 收集医院神经外科手术后垂体瘤标本62例(侵袭组32例,非侵袭组30例)和60例正常垂体组织标本(对照组)。通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测比较VEGF、PTEN、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphate-Serine/threonine Kinase, p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphate-mitogen-activated protein kinase, p-MAPK)在垂体瘤和正常垂体组织之间的表达差异。结果 垂体瘤标本中VEGF的表达水平显著高于对照组(P<0.05),在侵袭组(3.61±0.16)中的表达高于非侵袭组(2.06±0.13),差异有统计学意义(t=10.60, P<0.05),而PTEN在垂体瘤标本中的表达显著低于对照组(P<0.05),尤其在侵袭组(0.42±0.10)中的表达显著降低(t=6.31, P<0.05)。垂体瘤标本中p-Akt和p-MAPK水平显著高于对照组(P<0.05),且侵袭组(p-Akt 3.90±0.14; p-MAPK 2.52±0.11)明显高于非侵袭组(p-Akt 2.27±0.11; p-MAPK 1.89±0.05)(p-Akt,t=12.95, P<0.05; p-MAPK t=7.29, P<0.05)。结论 侵袭性垂体瘤中VEGF、p-Akt及p-MAPK水平明显增高,而PTEN表达水平显著降低,提示上述变化可能与垂体瘤的侵袭性相关,其可能为诊断并治疗侵袭性垂体瘤靶点的选择提供新方向。     

慢性丙肝患者DIL-4和Jagged-1的检测分析

目的 探讨Notch信号通路的两种配体DIL-4和Jagged-1与慢性丙型肝炎的关系.方法 采集慢性丙型肝炎患者及健康对照组的新鲜空腹抗凝血,分离单个核细胞,提取RNA,反转录为cDNA,应用实时定量RT-PCR技术检测DIL-4和Jagged-1.结果 慢性丙型肝炎患者组和正常对照组相比较,DIL-4和Jagged-1测定水平均明显升高,具有显著性差异,P＜0.05.结论 Notch配体在慢性丙型肝炎中明显升高,且转氨酶越高,Notch配体检测水平越高,Notch配体与慢性丙型肝炎存在相关性.