鸡胚发育的活体动态实验在教学中的应用

鸡的胚胎发育一直是人们进行胚胎学与发育生物学科学研究和基础实验的好材料.传统的胚胎学基础实验,多以鸡胚不同发育时期整体装片和组织切片的静态图像观察为主[1 2].近年来,随着实验技术方法的改进,本室在鸡的胚胎发育实验里增加了鸡胚活体动态观察的内容,采用静态与动态相结合,宏观与微观相结合的方法,观察鸡胚发育的过程,对学生了解动物胚胎发育的现象与规律起到了较好的实验效果.     

人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素重组质粒的构建与表达

目的构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况。方法通过重叠延伸PCR将dsFv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3′端连入6×His标签。先在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接,然后连入pEE14.1中,最终构建重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+。将重组质粒LipofectamineTM2000瞬时转染到CHO-K1细胞,采用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法验证目的基因的表达。结果重组质粒经酶切鉴定和测序验证与设计完全一致。RT-PCR结果显示只有重组质粒转染后的细胞能够扩增出1700bp的目的条带,ELISA检测瞬时转染细胞上清α干扰素的浓度约为1.1ng/ml,Western blotting检测显示重组质粒在转染细胞上清中获得表达。结论实现了抗体靶向干扰素在单一质粒中的高效表达,通过对表达蛋白的电性改造有利于后期治疗慢性乙肝的抗体靶向纳米粒药物的研制。     

NADPH-黄递酶组化方法的应用

采用NADPH-d组化方法显示中枢神经系统内的NOS阳性神经元已成为常用的一种技术方法，本文在实践中比较已有的技术方法，简化和改进某些操作步骤，得到了理想实验效果。现介绍如下。     

HBsAb靶向干扰素和IL-12双表达质粒pVAX-HBVE的构建与应用

目的构建能同时表达HBsAb靶向干扰素(dsFvα)和人白细胞介素12(hIL-12)的新型基因治疗质粒pVAX-HBVE。方法将pEE14.1-dsFvα质粒双酶切获得dsFvα片段,克隆入经同样双酶切后的载体pVAX-IRES-hIL-12 IRES序列的上游,构建重组表达质粒命名为pVAX-HBVE。将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,ELISA检测目的基因表达;提取重组质粒pVAXHBVE,注射到乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转入1.3拷贝HBV全基因组的BALB/c小鼠体内HBV基因拷贝数的变化。结果 pVAX-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pVAX-HBVE 30μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级。结论成功构建能够含有靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的双表达质粒,为慢性乙肝基因治疗提供新的策略。     

非冬眠期刺猬血液生理生化指标季节变化

目的了解刺猬的血液生理生化参数正常值及其季节性差异。方法采用BC-3000 Plus全自动血液细胞分析仪和BAYER-ADVIA-1650全自动生化分析仪,分别对刺猬的13项生理指标和15项生化指标进行了测定,并比较分析了春季、夏季和秋季的血液生理生化指标。结果刺猬雌体和雄体的平均红细胞体积(MCV)在夏季均显著小于秋季,雄体夏季的平均红细胞血红蛋白(MCH)小于秋季,说明刺猬秋季的血液载氧能力高于夏季。白细胞数目(WBC)没有季节和性别的显著差异,说明刺猬在三个季节的免疫能力差别不大。在血液生化指标中,刺猬(雌雄)春季和秋季的葡萄糖(GLU)含量均显著高于夏季;雌性刺猬春季的谷草转氨酶(AST)显著大于夏季和秋季;雄性刺猬的总胆固醇(CHOL)和低密度脂蛋白(LDLC)均表现为秋季的显著高于春季和夏季的。结论生理生化指标的不同反映了刺猬在活动能力、代谢水平、营养状况、健康状况等方面存在性别和季节性差异。     

不同龄小鼠胸髓NOS阳性神经元分布特点

目的观察不同龄小鼠脊髓胸段一氧化氮合酶阳性神经元的分布。方法用依赖还原型辅酶Ⅱ的黄递酶（NADPH-d）组织化学方法显示一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元在离乳鼠，三月鼠、十二月鼠脊髓胸段的分布特点。结果NOS阳性神经元在三个时期的小鼠脊髓胸段均有分布，其分布和形态有共性，亦有差异。比较三个时期小鼠脊髓胸段，NOS阳性神经元均主要集中在中央管周围、中间外例核和后角浅层，且发现随着鼠龄的增加，上述各部位核团的阳性神经元数目增多、体积增大、着色愈深，由淡蓝色变为蓝紫色。细胞突起由少变多且加长，整体上发育趋势是由不规则变为规则分布。结论一氧化氮合酶阳性神经元在小鼠胸段的分布与发育过程中各自行使的功能密切相关。     

基因芯片在肿瘤治疗研究中的应用

基因芯片技术系指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。该技术具有较高可行性、多样性．微型化和自动化四太特点，可用于肿瘤的诊断．分型．预期，及相关基因和药物的研究。奉支综合相关文献，对目前基因芯片在肿瘤治疗方面的研究现状进行简要概迷。     

哺乳动物的一氧化氮及一氧化氮合酶

一氧化氮作为一种重要的生物信使分子，过程中发挥重要的作用，并参与哺乳动物的神经调节、物一氧化氮及其合酶的性质、分布和作用。在动物血流调节、信号传导、免疫防御等多种生理及病理呼吸、消化、运动、免疫及学习行为。本文综述了哺乳动     

NO和ET在妊娠期间含量变化及生理意义

在哺乳动物，为确保胚胎的正常发育，阐明妊娠发生机制，探索胚胎致死、致畸诱发原因具有重要意义。本文综述了一氧化氮（nitric oxide，NO）、内皮素（endothelin，ET）在动物体内的生理学作用及其在妊娠期间、妊娠高血压综合征（pregnancy-induced hypertension syndrome，PIH，妊高征）情况下的含量变化和生理意义。     

复制型DNA疫苗的研究进展

复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗，既具有稳定性好、安全性高的优点，又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。