供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体对造血干细胞移植预后的影响

目的 观察供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（aKIR）对受者造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 1996年至2001年共行亲缘性人类白细胞抗原（HLA）全相合骨髓移植59例，以序列特异性引物多聚酶链反应法（SSP-PCR）检测供者aKIR的表型。分析供者表达aKIR对受者移植后病毒、细菌和真菌感染及出血、复发、存活情况的影响。结果 供者表达aKIR与受者移植后出血、病毒及细菌感染发生的概率无明显相关性；当供者表达KIR3DS1表型时，发生真菌感染概率增高（X^4．804，P=0．028）。供者表达aKIR对受者HSCT后存活率和白血病复发率均无明显影响。结论 亲缘性HLA全相合HSCT中，供者表达aKIR并不能改善受者的移植效果。     

广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的检测广东汉族人群HLA．Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率，分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法骨髓移植供者185例，抗凝血提取DNA，半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果在分辨水平检出Cw等位基因11个，其中分布频率较高的依次为：Cw*03(0．2580)、Cw*07(0．1887)、Cw*01(0．1732)、Cw*08(0．1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw．A单体型7个，HLA-Cw-B单体型20个，HLA—Cw．DRB1单体型10个。结论广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性，其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的：观察Tju103和CTLA4—Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法：半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4—Ig)共育后与骨髓细胞混合移植，观测移植后受情况。结果：A．单纯照射组：全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭；B．白血病CTX治疗组：全部小鼠于接种白血病细胞后16—23d死于白血病；C．单纯移植组：全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD)；D．CsA预防组：5只小鼠于移植后8—22d死亡，1只死于白血病，各有2只死于GVHD和感染，5只活过30d；E．Tju103处理组：4只小鼠于移植后9～26d死亡，2只死于GVHD，各有1只死于白血病和感染，6只活过30d；F．CTLA4—Ig处理组：2只小鼠于移植后17—26d死亡GVHD，8只活过30d。结论：Tju103和CTLA4—Ig均明显延长生存期，降低GVHD发生和严重程度，CTLA4—Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用，而Tju103没有。     

白细胞介素1受体竞争蛋白增加生长因子撤离后急性髓系白血病细胞凋亡

增殖调节失常和程序性死亡(凋亡)调节紊乱是急性髓系白血病发展的一个重要病理环节,其中对细胞因子的反应改变,使其连续进入细胞增殖周期是一个重要原因.本文探讨了撤离生长因子和用白细胞介素1受体竞争蛋白(IL-1RAP)阻断对白细胞介素1(IL-1)应用后对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响.一、IL-1对AML增殖的刺激作用是随着外源性IL-1浓度的增加而增强,当在1×10~6/ml细胞中加入500ng IL-1时,达到最大增殖倍数6.8倍.二、彻底洗掉IL-1再培养3天,IL-1最高剂量组自发性凋亡的比例最高,为48%,     

回输体外培养造血-免疫祖细胞加快亚去髓剂量化疗后造血-免疫功能的恢复

有相当一部分肿瘤可以通过提高化疗药物的剂量来提高治疗效果.然而,化疗强度的提高对机体造血-免疫系统的损伤也加重,造血-免疫功能的损伤会招致反复感染和残存瘤细胞的扩散,反而造成不利.本研究意在建立一种能加快高剂量化疗后造血.免疫功能恢复的方法,结果表明:有序的应用GM-CSF、IL-2、抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体建立了培养人造血-免疫祖细胞的培养体系,经过3天的培养GM-CSF扩增了5.8倍,对癌细胞的特异性杀伤提高了3.4～5.7倍.将培养后的造血-免疫祖细胞回输给接受了亚去髓化疗剂量的病人(n=19),同时应用G-CSF.化疗方案:乳腺癌、鼻咽癌:5-FU 7500mg/M~2、CF 1200mg/M~2、VP 900mg/M~2、cDDP 150mg/M~2、TAM 500mg/M~2.肺癌:CTX3600mg/M~2、ADM 150mg/M~2、VP16 900mg/M~2、cDDP150mg/M~2,骨肉瘤:IFO 12000mg/M~2、Mesna 6000mg/M~2、VP16 900mg/M~2、CDDP 150mg/M~2.中性粒细胞绝对数(ANC)维持<100/μl的天数和恢复>500/μl的天数,与未处理干细胞回输组相比,分别缩短了5.9天和5.7天(p<0.05,P<0.05)。用此培养体系培养的造血祖细胞回输对血小板的恢复无影响.抗菌素应用和住空气层流室时间,与未处理干细胞回输组相比,分别减少了5.6天和8.9天(P<0.005,p<0.05)。患者巨噬细胞吞噬功能恢复时间和对卡介     

苦参碱对高表达ABCG2人耐药鼻咽癌细胞NKG2D配体表达的诱导作用

目的:探讨苦参碱对高表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)人耐药鼻咽癌细胞CNE2/DDP(简写作ABCG2aHighCNE2/DDP)NKG2D配体表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的机制.方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDPP细胞对NK细胞的杀伤敏感性.结果:ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%.分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%.在效靶比为10:1、20:1时,NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%.处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000).结论:苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3).使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强.     

EGCG通过下调Bcl-2诱导KG1A白血病细胞凋亡宰

目的 研究EGCG对KGIA白血病细胞的作用,探讨其作用机制.方法 使用人的白血病细胞株KG1A细胞.MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用annexin v染料标记细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡.RT-PCR检测KGIA细胞Bcl-2家族mRNA的表达.结果 EGCG引起KG1A细胞活性的下降.ECA2G诱导KG1A细胞凋亡.且呈时间依赖性.EGCG诱导凋亡与下调Bcl-2和Bcl-xl有关.结论 EGCG可以通过下调Bcl-2和Bcl-xl诱导KG1A细胞凋亡.这些结果有助于提供新的有效联合方案,尤其是针对复发难治白血病的治疗.     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR VβT细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,建立TCR Vβ谱基因扫描技术,并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法,以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖,应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性,同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布,各亚家族表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖,此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用,对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分诱导KG1a细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体通路和死亡受体通路在中华眼镜蛇毒组分(naja naja actra venom component,NNAVC)诱导KG1a细胞凋亡过程中的作用。方法以人急性髓系白血病细胞株KG1a细胞为研究对象,采用Annexin V-FITC/PI荧光染色法进行凋亡细胞的形态学观察,流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的活性,ELISA法检测胞质内细胞色素C的表达水平,流式细胞仪分析TRAIL死亡受体(DR4、DR5)和诱骗受体(DcR1、DcR2)的改变。结果 NNAVC作用后,荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞,细胞凋亡率随药物作用浓度的增加而升高;Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3蛋白被激活,胞质内细胞色素C的表达明显增加;流式细胞仪检测结果显示,NNAVC具有降低死亡受体DR4和诱骗受体DcR1的表达率,而提高DR5和DcR2的表达水平的作用。结论线粒体凋亡通路和死亡受体通路均参与NNAVC诱导KG1a细胞凋亡的过程,这可能是NNAVC发挥抗白血病作用的机制之一。     

HLA5/6位点不全相合外周血干细胞移植治疗慢性髓系白血病加速期一例

患者 ,男 ,30岁。因左上腹剧烈疼痛 3ｄ于 1998年 5月15日第 1次入我院 ,诊断慢性髓系白血病 (ＣＭＬ) ,经常规化疗病情稳定在慢性期。 1999年 12月出现腹部及腰背部剧烈疼痛 ,伴发热 ,体重下降 ,血小板异常增多 [(10 83～ 15 73)×10 9/Ｌ],Ｘ线胸片提示白血病细胞肺部浸润 ,在山东医科大学确诊为ＣＭＬ加速期 (ＣＭＬ ＡＰ)。以ＣＯＰ(环磷酰胺、长春新碱、泼尼松 )联合化疗 1个疗程 ,腰背部疼痛减轻 ,但骨髓未完全缓解。经患者及家属同意行ＨＬＡ5 / 6位点不全相合异基因外周血干细胞移植术。供者为其胞兄 ,39岁 ,外周血及骨髓检查正常 ,…