AKT-GSK-3β信号途径在下调肝癌细胞化疗敏感性中的作用研究

目的 观察AKT-GSK-3β信号转导通路对化疗后肝癌细胞凋亡的影响,进一步探讨该通路在肝癌细胞化疗敏感性中的调控作用.方法 应用细胞培养与Western blot技术,检测肝癌细胞化疗后凋亡情况并分析其与AKT-GSK-3β信号通路活化的关系,通过特异性阻断信号通路方法,对AKT-GSK-3β通路调节肝癌细胞化疗敏感性进行验证.结果 肝癌细胞经奥沙利铂化疗后发生凋亡,表现为BAX蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少,同时AKT-GSK-3β通路磷酸化激活.阻断该通路后,化疗后肝癌细胞凋亡明显增加.结论 AKT-GSK-3β信号途径可以下调肝癌细胞化疗敏感性,与其化疗效果有密切联系.     

IL-6-JAK2/STAT3信号途径在骨质疏松症的作用机制研究

目的 通过检测IL-6与骨密度及骨小梁形成之间的关系,进一步验证JAK2/STAT3信号通路在骨质疏松中的作用机制。方法 选取100例骨质疏松患者（OP组）和100例非骨质疏松者（NOP组）,通过骨密度分析仪测定骨密度,静脉取外周血通过酶联免疫分析方法和全自动生化分析仪检测血清IL-6及碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP）水平。通过卵巢切除术构建大鼠骨质疏松模型,随机分为未阻断组、JAK/STAT阻断组、假手术组,分离静脉血及处死后分离股骨及胸椎骨通过ELISA及组织HE染色检测IL-6及骨小梁的情况。结果 OP组血清IL-6水平［（193.45±35.78）pg/ml］显著高于NOP组［（114.23±41.12 ）pg/ml］(t = 12.183,P ＜0.001）。大鼠模型JAK/STAT未阻断组骨密度［（0.499±0.21）g/cm2］与ALP水平［（66.43±9.18）U/L］较假手术组均明显降低（F = 0.207,22.689;P ＜0.001）,说明造模成功。而大鼠模型JAK/STAT阻断组的骨密度［（0.707±0.19）g/cm2］与ALP水平［（89.67±8.98）U/L］明显高于未阻断组（F = 0.215,26.464;P ＜0.001）;HE染色显示JAK/STAT阻断组骨小梁的密度及质量明显高于未阻断组。结论 JAK2/STAT3信号途径影响骨小梁形成,并以此下调骨密度从而在骨质疏松症的发生及发展过程中发挥着重要的作用。     

M2型肿瘤相关巨噬细胞通过p53途径下调肝癌化疗敏感性的机制研究

目的 通过研究M2肿瘤相关巨噬细胞调控p53表达来下调肝癌化疗敏感性的机制,以此拓宽建立抗肿瘤耐药的措施.方法 构建小鼠肝癌模型及分离肝癌组织,研磨组织提取巨噬细胞,通过RT-PCR方法检测巨噬细胞表面CD206及CD163分子表达情况.培养人单核巨噬细胞(THP-1),PMA (100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)作用诱导分化成肿瘤相关巨噬细胞后,与肝癌细胞(HepG2、SMMC7721,Hep 3B)共培养,加入奥沙利铂(20μ g/mL)作用24小时,通过Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase 3、抗凋亡蛋白Bcl-2及p53的表达,通过MTT方法检测化疗对肝癌细胞增殖情况.结果 成功构建了肝癌模型,分离出了肝癌组织巨噬细胞,RT-PCR检测CD206和CD163的表达显著升高;人单核细胞(THP-1)经加入PMA(100ng/mL)和IL-4 (100ng/mL)分化诱导48h后其细胞的表面CD206和CD163的表达明显高于THP1分化诱导的细胞表面表达量;肝癌细胞SMMC7721和HepG2与M2型肿瘤相关巨噬细胞共培养24h,经奥沙利铂作用后,肿瘤细胞Bcl-2表达明显升高,Caspase 3和p53的表达显著降低;肿瘤细胞的增殖抑制率明显降低,而Hep 3B细胞的凋亡则明显降低.结论 M2型肿瘤相关巨噬细胞调控肝癌细胞中p53的表达,进而抑制了肝癌化疗的敏感性.     

A族链球菌感染小鼠巨噬细胞初期大量诱生SOCS-1蛋白的机制研究

摘要:目的　本研究利用A族链球菌（GAS）感染小鼠巨噬细胞,来分析SOCS-1的表达情况,以此探索GAS进行免疫逃逸的可能机制。方法　同时培养RAW264.7巨噬细胞和C57小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）,以感染复数（MOI）100∶1加入对数生长期GAS及经热灭活处理的GAS（70℃加热处理60 min）刺激RAW264.7及BMDMs巨噬细胞1 h,弃去细菌后,继续培养2,4,6,8,10 h,分别收集细胞,通过RT-PCR及Western blot 方法检测JAK/STAT通路的活化及SOCS-1的表达情况。结果　GAS感染RAW264.7及BMDMs细胞4 h后p-STAT1的水平明显高于热灭活组（P＜0.05）,6 h达到高峰,8 h后开始降低;同时,两组细胞SOCS-1基因的表达,GAS组4 h开始明显升高,6 h达到高峰,8 h开始降低;而热灭活GAS组SOCS-1基因在感染后6 h后开始升高,且升高的幅度明显小于GAS组（P＜0.05）。SOCS-1蛋白在GAS感染后6 h可以检测到,而热灭活GAS刺激细胞10h检测不到SOCS-1的表达。结论　GAS感染小鼠初期通过快速活化JAK/STAT通路引起SOCS-1的表达,以此来逃避机体的免疫攻击。     

肾性贫血患者外周血红细胞参数与微炎症指标相关性分析

目的 通过分析肾性贫血患者红细胞参数与微炎症指标的相关性,对肾性贫血患者微炎症做出有效提示,利于微炎症状态尽早纠正。方法选取2017年3月～2018年3月在肾内科住院的慢性肾衰竭(CRF)伴贫血患者120例作为病例组,选同期体检正常人群150例作为对照组。对病例组与对照组血细胞参数RBC,HGB,MCV,MCH,MCHC和RDW进行检测; 对肾性贫血患者红细胞形态学进行检查; 对微炎症相关指标CRP,ALB和A/G进行检测; 对红细胞参数和微炎症指标进行相关性分析。结果 病例组RDW和CRP明显高于对照组,RBC,ALB和A/G值明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),病例组MCV,MCH和MCHC与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05); 细胞形态学提示,肾性贫血患者成熟红细胞普遍存着红细胞大小不等、异形性的特点; 病例组RDW与CRP,ALB和A/G值存在相关性。结论 肾性贫血以正细胞正色素性贫血为主,并伴有一定比例其他类型的贫血,RDW与微炎症状态有关,RDW可对肾性贫血患者处于微炎症状态起到提示作用。     

红细胞和血小板相关参数对肝硬化的应用价值

目的探讨红细胞和血小板相关参数变化与肝硬化病情发展的关系,为临床肝硬化病情发展及预后判断提供依据。方法选取2012年4月1日至2014年4月1日确诊为肝硬化的183例初诊患者为试验组,另选取同期体检健康者167例为对照组,抽取空腹静脉血,检测血常规、肝功能各项指标和凝血酶原时间(PT),并按照Child-Pugh分级法将试验组分为A、B、C三级进行数据分析。结果与对照组比较,试验组红细胞(RBC)计数[(3.51±0.31)×1012/L]和血小板(PLT)计数[(105.76±20.77)×109/L]均减低,组间比较差异均有统计学意义(P0.05);红细胞平均体积(MCV)、平均血小板体积(MPV)、红细胞体积分布宽度(RDW)、血小板体积分布宽度(PDW)分别为(94.99±10.69)fL、(9.18±1.20)fL、(13.79±1.97)%、(17.58±2.24)%,均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Child-Pugh积分的增加,RBC与PLT计数逐渐减低、RDW逐渐增大,差异均有统计学意义(P0.05);B、C级MCV较A级增大,C级PDW较A、B级增大,差异均有统计学意义(P0.05);MPV在不同分级患者间比较差异无统计学意义(P0.05)。肝硬化患者以正细胞均一性贫血(51.37%)最多见,RBC和PLT直方图均发生改变。结论 RBC和PLT参数可以作为肝硬化患者肝脏储备功能和贫血类型的观测指标,对病情监测、指导临床治疗及判断预后都具有一定的参考意义。     

TLR4与MyD88蛋白在慢性肾功能不全组织中的表达研究

目的 通过研究Toll受体4(TLR4)及髓样细胞分化因子88(MyD88)在慢性肾功能不全组织中的表达,探讨TLR4/MyD88蛋白在慢性肾功能不全发生发展中的作用。方法 选取2011.07～2014.05华北理工大学附属医院确诊的40例肾功能不全的患者为观察对象,40例肾癌切除患者未被浸润的肾组织为对照,通过免疫组化方法检测慢性肾功能不全患者肾脏组织中TLR4及MyD88的表达情况,通过腺嘌呤(200mg/kg)连续灌胃制备大鼠模型,定时逆转录PCR(RT-PCR)及Western blot检测TLR4及MyD88的表达,同时将大鼠模型分为TLR4组、未阻断组和IgG对照组分别检测外周血中尿素氮(BNN)及肌酐(RE)的浓度。结果 慢性肾功能不全患者肾脏组织中TLR4及MyD88的表达明显高于正常对照组; 腺嘌呤制备的大鼠模型中的TLR4及MyD88的基因及蛋白的表达明显高于正常大鼠; TLR4阻断组尿素氮(15.65±3.97mmol/L)明显低于未阻断组(23.33±7.62mmol/L)及IgG对照组(26.33±6.77mmol/L)(t=2.887,P=0.045); 肌酐(523.89±52.67μmol/L)也明显低于未阻断组(789.51±98.17μmol/L)及IgG对照组(809.51±94.19μmol/L)(t=4.125,P=0.015)。结论 TLR4及MyD88蛋白在慢性肾功能不全中表达增加,并且显著促进疾病的发展过程。