肾脏疾病中医证候动物模型的研究进展

中医理论认为,肾为先天之本,十二经之根,肾阴肾阳为人一身之元阴、元阳.肾的阴阳亏损,会引起其他脏器的生理功能异常;反之,其他脏器的病变日久也可引起肾的阴阳亏损,即所谓"久病及肾".传统中医理论对肾脏疾病已形成了一套完整的辨证论治体系,留下许多宝贵的治疗经验和具有独特疗效的经典方药.当前,在中医理论指导下运用现代的实验方法建立相应的中医证候动物模型,已成为研究中医药治疗肾脏疾病机理的主要途径.本文仅就当前常用的证候动物模型的造模方法做一综述.     

丹酚酸B对活化的系膜细胞TGF-β_1受体和Smad2表达的影响

目的:通过观察丹酚酸B对活化的系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)受体和Sma与Mad的同源基因2(Smad2)分子表达的影响,探讨丹酚酸B拮抗系膜细胞活化及肾纤维化的机制。方法:分离纯化大鼠肾小球系膜细胞,TGF-β1刺激建立系膜细胞活化模型并检测Smad2、Smad7信号分子表达。丹酚酸B(剂量分别为10-6mol/L、10-5mol/L)进行干预,免疫荧光及蛋白印记法观察对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响,蛋白免疫印迹法检测系膜细胞TGF-β1两型受体(TβRⅠ、TβRⅡ)和Smad2信号分子表达的变化。结果:5μg/L TGF-β1刺激系膜细胞24h可成功制备系膜细胞活化模型,在系膜细胞活化早期即可见Smad2分子的显著磷酸化;10-6mol/L、10-5mol/L丹酚酸B均可明显抑制其活化标志蛋白α-SMA的表达;丹酚酸B干预可致系膜细胞TGF-β1两型受体表达减少,Smad2的磷酸化状态被抑制。结论:丹酚酸B可通过抑制大鼠肾小球系膜细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达和信号分子Smad2的磷酸化而拮抗其活化,这可能是丹酚酸B抗肾纤维化的细胞学机制之一。     

喉癌早期误诊的相关因素研究

目的：探讨喉癌早期误诊的相关因素。方法：对68例喉癌患者的临床资料进行回顾性研究。结果：68例中54例于发病后3周内就诊，14例于发病后3周后就诊，均未发现喉部肿瘤。68例患者在复诊2次以上才发现喉部肿瘤。结论：喉癌早期误诊因素是多方面的，与患者对医学知识的了解程度、医生对本病的重视程度有关，同时也与肿瘤的生长部位及早期症状有关。     

化瘀导滞汤防治庆大霉素所致大鼠肾损伤的实验研究

目的:探讨化瘀导滞汤防治庆大霉素所致肾毒性损伤的作用和部分机理。方法:18只健康雄性W ister大鼠随机分为3组,每组6只:正常组、模型组、治疗组。给予庆大霉素造成肾毒性损伤,于造模后5天取材,光镜和电镜下观察肾组织形态学改变,计算肾系数、检测血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白总量,氧化应激相关指标SOD、MDA、NOS的变化,检测NF-кB蛋白表达水平。结果:模型组大鼠与正常组比较:光镜下可见肾小管上皮细胞以变性为主,部分坏死;有较多的蛋白管型和少量的细胞管型、颗粒管型。电镜下可见肾小管上皮细胞胞浆中有大量脂滴存在,细胞的线粒体肿胀、内质网明显扩张,治疗组病变轻于模型组。模型组肾系数、血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白总量、NF-кB蛋白表达水平以及MDA、NOS明显高于正常组,SOD明显低于正常组(P<0.01),治疗组除24h尿蛋白总量外,其余指标与模型组相比有明显改善(P<0.01)。结论:化瘀导滞汤有良好的防治庆大霉素所致肾毒性损伤的作用,并提示与早期抗脂质过氧化损伤有关。     

川芎嗪对人肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达的影响

目的：观察川芎嗪（TMP）对人肾小管上皮细胞Smad转录共抑制因子SnoN蛋白表达水平的影响。方法：体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,应用MTI＂法检测不同浓度TMP以及转化生长因子-β1（TGF—β1）、肝细胞生长因子（HGF）对细胞增殖的影响,应用Westernblot法检测细胞裂解液中SnoN蛋白表达水平。结果：与对照组比较,50μg／ml川芎嗪孵育HK-2细胞24小时可显著诱导细胞核中SnoN蛋白的表达,与50rig／mlHGF诱导的SnoN蛋白表达水平没有明显差异（P〉0．05）,川芎嗪与HGF联合用药后加入TGF—β1共刺激细胞,可明显抑制TGF—β1诱导的SnoN蛋白的降解。结论：川芎嗪可诱导HK-2细胞中SnoN蛋白表达,并且可能在阻断TGF—β1诱导的SnoN蛋白降解方面,与HGF具有协同作用。     

肾脏疾病中医证候动物模型的研究进展

中医理论认为,肾为先天之本,十二经之根,肾阴肾阳为人一身之元阴、元阳。肾的阴阳亏损,会引起其他脏器的生理功能异常;反之,其他脏器的病变日久也可引起肾的阴阳亏损,即所谓“久病及肾”。传统中医理论对肾脏疾病已形成了一套完整的辨证论治体系,留下许多宝贵的治疗经验和具有独特疗效的经典方药。当前。在中医理论指导下运用现代的实验方法建立相应的中医证候动物模型,已成为研究中医药治疗肾脏疾病机理的主要途径。本文仅就当前常用的证候动物模型的造模方法做一综述。     

人源肿瘤异种移植(PDTX)模型建立及药效学检测初步探讨

目的建立人源肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenografts,PDTX)模型,观察模型肿瘤移植瘤的成瘤潜伏期、成瘤率、肿瘤体积、肿瘤的侵袭和转移等情况。方法纳入2015年4~12月南京鼓楼医院胸心外科7例胸部肿瘤患者,其中男5例、女2例,年龄61~71岁。4例食管肿瘤,3例肺部肿瘤。将手术切除患者的新鲜肿瘤组织移植于NOD-Prkdcem26Il2rgem26Nju(NCG)小鼠皮下,观察移植瘤的成瘤潜伏期、成瘤率、肿瘤体积、肿瘤的侵袭和转移情况以及病理HE染色、免疫组化,比较PDTX模型肿瘤组织与患者原发肿瘤组织病理的一致性。结果 7例(其中1例术后病理显示良性)患者PDTX模型中成功4例,建模成功率为66.7%,其中4例食管癌成功2例。PDTX模型保持了肿瘤细胞的分化程度、形态特征、结构特点。结论 PDTX模型的病理学及分子生物学特征与原始肿瘤保持一致,可以作为临床肿瘤患者的"替身",用于临床药效学筛选和新药研发。     

桃核承气汤对庆大霉素肾毒性大鼠的治疗作用研究

目的 观察桃核承气汤对庆大霉素所致大鼠肾毒性损伤模型的治疗作用及部分机制.方法 采用腹腔注射庆大霉素法制作大鼠肾毒性模型,通过生化、病理检测和蛋白免疫印迹方法观察各组大鼠肾功能、肾组织病理形态、氧化产物及酶类的变化及信号通路分子p38、核因子κB(NF-κB)蛋白表达的变化,明确桃核承气汤的疗效.结果 桃核承气汤治疗一周后,可改善肾功能,减轻肾组织病理改变,显著降低肾皮质MDA含量和NOS酶活性、提高SOD酶活性,NF-κB蛋白表达明显减少.结论 桃核承气汤可以通过改善肾脏氧化损伤对庆大霉素肾毒性起到一定的治疗作用.     

化瘀导滞汤防治庆大霉素诱导的大鼠肾纤维化

目的： 探讨化瘀导滞汤对庆大霉素所致的肾间质纤维化的影响及作用机制。方法: 32只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常组（6只）、肾纤维化模型组（13只）、化瘀导滞汤治疗组（13只）。肾纤维化模型组和化瘀导滞汤治疗组给予庆大霉素造成肾纤维化,造模同时,治疗组给予化瘀导滞汤煎剂灌胃干预,直至取材。于造模后30 d取材,光镜下观察肾组织形态学改变,计算肾系数、检测血肌酐、血尿素氮、24 h尿蛋白总量,检测各组大鼠肾组织α－平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Smad通路蛋白2（Smad2）、Smad通路蛋白7（Smad7）的表达水平。结果: 肾纤维化模型组大鼠与正常组比较,光镜下可见肾小管上皮细胞以坏死为主,部分变性,肾小管萎缩和扩张,间质中有成纤维细胞增生和炎症细胞浸润,间质明显增宽。模型组肾系数、血肌酐、血尿素氮、24 h尿蛋白总量明显高于正常组（P<0.01）,α-SMA、Smad2蛋白表达明显高于正常组（P<0.01）,Smad7蛋白表达明显低于正常组（P<0.01）;化瘀导滞汤治疗组与肾纤维化模型组比较,光镜下肾小管结构有明显改善,治疗组肾系数、血肌酐、血尿素氮、24 h尿蛋白总量与模型组比较有显著下降（P<0.01）,治疗组α-SMA、Smad2蛋白表达明显低于模型组（P<0.01）,Smad7蛋白表达无明显变化（P>0.05）。结论: 化瘀导滞汤有良好的防治庆大霉素诱导的肾纤维化作用。     

六味地黄丸含药血清对HK-2细胞TGF-β/Smad信号通路的影响

目的: 观察六味地黄丸含药血清对HK-2细胞增殖及其Smad通路信号影响。方法: MTT法检测大鼠5%、10%、20%空白血清与5%、10%、20%含药血清对HK-2细胞增殖的影响,并采用蛋白印迹法检测10%含药血清对HK-2细胞Smad通路信号分子蛋白表达的影响。结果: 六味地黄丸含药血清可以促进HK-2细胞增殖;在HK-2细胞中,TGF-β₁可明显促进Smad2蛋白的磷酸化,而10%六味地黄丸含药血清具有明显的抑制效应。10%六味地黄丸含药血清亦可促进SnoN蛋白表达,明显高于对照组和空白大鼠血清组。结论: 六味地黄丸含药血清能够抑制TGF-β₁诱导的HK-2细胞Smad2蛋白的磷酸化,促进TGF-β/Smad通路的负性调控因子SnoN蛋白的表达。