幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a( ),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌（H．pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表达系统，探索研制H．pylorl疫苗的新途径。[方法]培养和收集H．pylori NCTC11637菌株，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序，再将目的基因克隆入PET32a（＋），构建重组表达载体PET32a—OMP36。转化E．coli BL21后舢诱导表达，经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白。[结果]测序分析表明。插入的基因片断为987bp，表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为36kDa。并显示具有良好的抗原性。SDS—PAGE检测表明，表达量占细菌总蛋白的37％。镍亲和层析纯化率约92％。Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的编码基因，其表达产物0MP36有望成为新的Hp疫苗候选分子，为H．pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

放射工作人员职业健康监护中存在的问题与对策

目的 探讨放射工作人员职业健康监护工作中存在的主检结论模糊区域、项目开展情况及漏检等问题,为现行GBZ 98-2002《放射工作人员健康标准》的使用及修订提供参考。方法 结合放射作业人员职业健康监护工作中遇到的实际问题,在充分调查论证的基础上进行综合分析及探讨,提出相应的解决办法和建议。结果 放射工作人员职业健康监护依据的技术文件需不断更新完善,体检机构也应不断完善体检项目,以客观公正地判断每个劳动者的健康状况及其所患职业病损伤的程度,维护劳动者健康及其相关权益。结论 只有职业健康检查机构、用人单位和劳动者共同努力,才能做好职业健康监护工作。     

胶乳增强免疫比浊法在甲胎蛋白测定的方法学评价

目的对胶乳增强免疫比浊法(LEIA法)测定甲胎蛋白(AFP)水平,并进行方法学评价。方法用LEIA法测定178例血清的AFP水平,同时采用化学发光免疫分析仪法(CLIA法)对AFP水平进行测定。结果 LEIA法测定AFP的灵敏度为0.65 ng/mL,低、中、高水平的批内CV分别为0.98%、0.92%、0.89%;批间CV分别为1.63%、1.53%、1.45%。回收率96.3%~102.9%。结论 LEIA法是测定AFP较好的方法,适合普及推广。     

幽门螺杆菌47kDa微孔蛋白基因的克隆表达及特性鉴定

目的对人幽门螺杆菌(H.pylori)编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定,探索研制H.pylori疫苗的新途径。方法培养和收集H.pylori标准菌株NTTC11637及临床菌株,采用酚∶氯仿抽提、纯化基因组DNA。设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增omp47基因片断。将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后,转化至E.coli DH5α及BL21,碱裂解提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定并进行序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片断为1284bp,编码427个氨基酸。与GenBank公布的H.pylori标准株26695、43504及J99序列比对,核苷酸同源性高达94%~96%,编码氨基酸同源性96%~99%。经SDS-PAGE检测,电泳图谱上显示一条相对分子量为47kda的新生蛋白带。Western blot检测表明重组蛋白有较好的抗原性。结论成功克隆了外膜微孔蛋白OMP47的编码基因,为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

常州市化工行业工人脂肪肝患病情况调查

目的了解化工产业工人脂肪肝发病情况，探索相关预防措施。方法选择常州市多家化工企业作业工人1880名为观察组，其他行业人员1852人作为对照组，检测工作场所中有害物质浓度，采用B型超声仪对人体肝脏进行检查，同时检查其肝功能、血脂水平。结果观察组工作场所中存有甲苯、二甲苯、氯乙烯、苯胺、正己烷，但检测数据未超标；观察组1880人中检出脂肪肝患者366人，检出率为19．5％；对照组1852人检出脂肪肝274人，检出率为14．8％，2组差异有统计学意义（x^2=14．3，P〈0．01）；2组间不同年龄组脂肪肝检出率差异有统计学意义（x^2=12．56，P〈0．01）。结论化工作业工人脂肪肝发病率高于其他行业，需进一步采取措施改善该职业人群的健康状况。     

某农机厂噪声作业男工健康状况的动态分析

目的调查分析职业性噪声对工人心血管系统的动态影响。方法以常州某农机厂150名接触噪声的作业男工为噪声组,以企业行政、后勤及不接触噪声男工125人为对照组。采用现场环境噪声测试和班前班后职业性健康检查等方法进行调查研究,比较其血压、心率、心电图的变化情况。结果噪声组班前班后动态收缩压改变差异有统计学意义(P0.05),噪声组与对照组班前收缩压、舒张压、心率比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论噪声对作业工人的动态血压、脉率、心电图有一定影响,需进一步采取措施预防。     

常州市主要水体环境嗜肺军团菌的分布特点与规律

目的 调查常州市水体环境军团菌时间、空间分布状况.方法 采取分层抽样方法分别对冷却塔水、居民自来水、桶装饮用水、公园湖水及游泳池水进行嗜肺军团菌检测.结果冷却塔水嗜肺军团菌检出率为22.7%、公园湖水为7.4%、居民饮用水及游泳池检出率为0.结论 空调冷却水、公园湖水为军团菌易污染水体,应加强预防措施.     

幽门螺杆菌外膜蛋白hopX基因克隆表达及生物信息学分析

目的：构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）hopX外膜蛋白编码基因的重组质粒,并进行生物信息学分析,探索筛选Hp疫苗的新途径。方法：应用PCR技术从Hp基因组扩增hopX外膜蛋白编码基因片段,TA克隆后测序分析,用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体hopX-pQE30转化E.coliM15,IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白。结果：测序分析表明hopX基因全长为1284bp,与Gene Bank公布的其他Hp菌株的基因序列同源性为96%～97%,氨基酸同源性为97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域。SDS-PAGE检测表明,47kD处有一新生的蛋白带,Western blot检测重组蛋白具有良好的抗原活性。结论：首次获得HpNCTC11637菌株hopX基因,其表达产物为外膜蛋白生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。